Rozbor moču a slín pre tuberkulózu

Rozmanitosť rôznych analýz tuberkulózy nie je vysvetlená jednoduchou diagnostikou tejto choroby, ale jej zákernosťou. Ľudia sa od nepamäti snažil nájsť spôsob, ako identifikovať suchoty v počiatočných fázach, a preto vykonali rôzne štúdie na pacientoch, z ktorých niektoré sú skutočne zakorenila ako metódy diagnostiky ochorení alebo ako prostriedok na sledovanie procesu choroby.

Čo sú testy moču a slín?

Bac analýza tuberkulózy slin a moču je vykonaná na detekciu prítomnosti činidla v tele. Účelom týchto štúdií je však potvrdiť ochorenie s existujúcimi symptómami skôr než nájsť, pretože pre primárnu preventívnu diagnostiku existuje veľa ďalších spoľahlivejších metód.

Okrem toho, moču alebo spúta a analýzu slín na TB lekári môžu vykonávať na identifikáciu prechodu uzavretú formu choroby do otvorených, ktorý je charakterizovaný tým, uvoľnenie veľkého množstva baktérií s prírodnými tekutiny a výkaly pacienta, a preto sa veľmi epidemiologicky nebezpečná pre ostatných.

Skúška moču

Odpoveď na otázku, ako prejsť test močovej skúšky na tuberkulózu, je dosť jednoduchá. Moč pre tuberkulózu sa zhromažďuje ako akákoľvek všeobecná analýza tejto tekutiny, známej každému deťom:

  1. Je potrebné zhromaždiť prvú časť moču ráno, zatiaľ čo sa zhromažďuje iba stredná časť a nie tá, ktorá opúšťa prvú alebo poslednú časť.
  2. Pred zberom by mala byť dôkladne umyť ako obal a urogenitálneho traktu seba, aby bolo vnútri poháre nedostal nič navyše: proteín, krv, baktérie, atď.
  3. Požadované množstvo kvapaliny pre štúdiu je len 50-100 ml, takže nepríďte polovičnú nádobu s močom.

OAM je možné užívať na každej klinike, avšak len špeciálne laboratóriá môžu nájsť tuberkulózne tuberkulózy, ktoré nie sú k dispozícii v každej lokalite v Rusku. Normálne výsledky tohto prieskumu vyzerajú takto:

  1. Farba: žltá, slnečno-žltá alebo slama.
  2. Transparentnosť: vysoká.
  3. Vôňa: ostré.
  4. PH reakcie: 4-7.
  5. Hustota: 1012-1022 g / l.
  6. Proteín: nie, ale niekedy je povolená hodnota až do 0,033 g / l.
  7. Glukóza: do 0,8 mmol / l.
  8. Ketónové telieska: nie.
  9. Bilirubín: nie.
  10. Urolilinogén: 5 až 10 mg / l.
  11. Hemoglobín: nie.
  12. Erytrocyty: u žien maximálna prípustná hodnota je až tri, u mužov až 1 v zornom poli.
  13. Leukocyty: povolený počet telies v zornom poli je 6 u žien a najviac 3 u mužov.
  14. Epitelové bunky: do 10 ks. v očiach.
  15. Cylindre: nie alebo tam je individuálna hyaline.
  16. Soli: nie.
  17. Baktérie: nie.
  18. Huby: nie.
  19. Parazity: nie, ale ak existuje, potom to nie je strašné: práve v tomto prípade sa uskutočňuje liečba anthelmintickými liekmi.

Indikátory OAM pre tuberkulózu zvyčajne zostávajú rovnaké. Výnimkou sú iba akútne formy choroby, kedy je moč zmenený v dôsledku abnormalít vo vnútorných orgánoch a v chronických lézií pľúc alebo kostí, keď sa môže vykonať test byť príznakmi amyloidózy - porúch metabolizmu proteínov, v ktorom sa proteín byť prítomné v výsledky prieskumu.

Výnimkou je tuberkulóza obličiek alebo močových ciest - najčastejšie mimopľúcna ochorenie spôsobené prenosom infekcie krvného riečišťa, tuberkulóza je na analýzu moču sa veľmi líšia. V tomto prípade sú v ňom pozorované nasledovné javy:

  • prudko kyslá pretrvávajúca reakcia;
  • leukocyturia - bielych krviniek v moči;
  • proteinúria - proteín v moči;
  • erytrocytria - krv v moči;
  • pyúria - určí sa do moču.

Aj v akútnych ochorení alebo pri tuberkulóze obličiek a močových ciest infekcií v moči je prítomná bacily aktívna forma činidla, ktoré je určené farbením Ziehl-Nelson.

Skúmanie slin

V skutočnosti je LHC testy slín pre tuberkulózu nevyrábajú. Rozbor slín často nevzdelaní ľudia nazývali hlien na TBC. Namiesto spútum rozbor slín na TBC možno vykonať len v prípade veľmi malých novorodencov, ktorí nie sú schopní pľuvať kvapalné vykašliavanie, pretože sa automaticky prehĺta raz bezprostredne po vykašliavanie. Avšak, v tomto prípade lekári jednoducho vziať biopsia tkaniva alebo odňať pľúcna tajomstvo so sondou, a to plazenie sa slinami.

Spúta analýza sa vykonáva na patogénu tiež metódou Ziehl-Nelson. V tomto prípade, okrem bacily sú niektoré príznaky pľúcne patológie vidieť voľným okom: vláknité odliatky, hnis, krv, kúsky tkaniva, a tzv šošovka - veľké inklúzie špendlíkovej hlavičky alebo menej kruhového tvaru, vnútri ktoré má zvyčajne veľký počet bacilov.

Ziehl-Nelsonova farbiaca metóda

Spôsob farbenie Ziehl-Nelson na báze kyseliny odporu Mycobacterium tuberculosis, ktorý môže byť farebný iba na tepelnom spracovaní. V čase tejto štúdie, telesné tkanive, spútum, moč, krv, alebo iné látky, analýza, ktorá je nevyhnutná prítomnosť Úradu ponechať v priaznivé prostredie pre osivo k množeniu baktérií, ak tam sú, samozrejme, a potom sa zahrieva a zafarbia. Po tom, všetko sa udržuje v kyseline až bezfarebný a potom farbené bez zahrievania má inú sfarbenie. Výsledkom je, že MOP je pomerne ľahké zistiť, ako sú farby prvý náter a dobrý vyniknúť.

Poznámkový blok ftiziatriká - tuberkulóza

Všetko, čo chcete vedieť o tuberkulóze

Testy krvi a moču na tuberkulózu

VA Koshechkin, Z.A. Ivanova

Prvky červenej krvi, spravidla malé zmeny v tuberkulóze. Iba po akútnej strate krvi z pľúc alebo čriev môže byť anémia. Mierny pokles hladiny hemoglobínu možno pozorovať v chronických formách pľúcnej tuberkulózy vláknitého-kavernózneho pôvodu.

Jedným z indikátorov aktivity tuberkulózy je ESR (sedimentácia erytrocytov). Zrýchlená ESR koreluje nielen s aktivitou a rozsahom súčasného čerstvého procesu, ale aj s exacerbáciou chronických, obzvlášť vláknitých-kavernóznych procesov.

Prvky leukocytovej frakcie krvi reagovať aktívnejšie na proces tuberkulózy.
Bežne existujú tri fázy zmien v leukocytovej frakcii krvi súvisiacej s povahou lézií pri pľúcnej tuberkulóze.
1. Neutrofilná fáza boja. V krvi sa zvyšuje podiel neutrofilov, v dôsledku čoho dochádza k posunu vzoru doľava. Eozinofily nie sú prítomné, počet lymfocytov a monocytov je znížený.
2. Monocytická fáza - Prekonanie infekcie. V krvi sa zvyšuje počet lymfocytov, krvný vzorec sa posúva doľava, počet neutrofilov sa znižuje, detekujú sa jednotlivé eozinofily.
3. Fáza obnovy. Podiel lymfocytov a eozinofilov sa zvyšuje. Krvný obraz sa postupne normalizuje.
Táto fázová separácia odráža iba celkovú krvnú reakciu.

Jadrový posun neutrofilov pri tuberkulóze
Okrem kvantitatívnej skupiny má neutrofilná skupina kvalitatívnu charakteristiku, ktorá je oveľa tenšia a predtým naznačuje rôzne patologické procesy.

Tuberkulóza dospelých je zvyčajne sekundárny proces, najčastejšie spôsobuje v krvi iba zvýšenie neutrofilov. Pri výrazných infiltrovaných pneumónnych formách a javoch pľúcneho rozpadu tkaniva je posun neutrofilov doľava pomerne odlišný a môže dosiahnuť až 20-30% bodnutia.

Pľúcne infiltrácie rovnaká nerozkladá, a fokálna TB počas prvého exacerbácie alebo identifikácie pri teplote subfebrile a len viditeľné funkčné poruchy poskytujú menej výrazný posun. Zároveň zostávajúce prvky hemogramu nemôžu vôbec odhaliť abnormality. Dôkladné stanovenie jadrového posunu je preto dôležité pri tuberkulóze.

Doktrínu jadrového posunu neutrofilov podporil Arnet (1905) na základe štúdie krvi pri rôznych infekciách, vrátane tuberkulózy.

Pri vykonávaní náročných výpočtov s mnohými náčrty si Arnet všimol určitú pravidelnosť v konfigurácii jadier neutrofilov.

Krv zdravého človeka obsahuje:

  • 5% neutrofilov s neriedeným krkom, neroztriešteným jadrom (1. trieda);
  • 35% neutrofilov s dvomi segmentmi spojenými kontruktúrou (trieda II);
  • 41% neutrofilov s tromi segmentmi (stupeň III);
  • 17% neutrofilov so štyrmi segmentmi (stupeň IV);
  • 2% neutrofilov s piatimi segmentmi (trieda V).

Okrem segmentácie jadra Arnet zohľadnil aj svoj tvar. Takže pre prvú triedu vybral niekoľko podtried na mieru depresie nesegmentovaného jadra. Ostatné triedy sú rozdelené na podtriedy v závislosti od tvaru segmentov.

Pre infekcie pomere k ich závažnosti počtu mnogosegmentirovannyh foriem sa znižuje počet malosegmentirovannyh (2-3 segment) a nesegmentované (ktoré sú relatívne malé bunky) sa zvyšuje.

V schéme Arnet je počet nesegmentovaných neutrofilov triedy I uvedený na ľavej strane; vpravo je počet buniek potom t. d. V dôsledku toho, zvýšenie non-segmentového tvaru a počtu malosegmentirovannyh ľavá strana zväčšuje obvod buniek triedy II, trieda III a a tam je "ľavý shift".

rozbor moču
Vylučovanie moču u pacientov s tuberkulózou je takmer normálne. Patologické zmeny v moči môžu byť, ak tuberkulóza postihuje obličky alebo močový trakt.
Pacienti s chronickými formami pľúcnej tuberkulózy alebo kostí môžu mať príznaky amyloidózy.

3.7 Analýza krvi a moču.

Prvky červenej krvi sa zvyčajne nemenia s tuberkulózou. Iba po akútnej strate krvi z pľúc alebo čriev môže byť anémia. Mierny pokles hladiny hemoglobínu možno pozorovať v chronických formách pľúcnej tuberkulózy vláknitého-kavernózneho pôvodu. Jedným z indikátorov tuberkulóznej aktivity procesov je ESR (rýchlosť sedimentácie erytrocytov). Zrýchlil ESR koreluje nielen s dĺžkou aktuálne aktivity a čerstvé procesu, ale tiež so zhoršením chronického, najmä fibrocavernous procesov. Prvky leukocytovej frakcie krvi reagujú aktívnejšie na proces tuberkulózy.

Zvyčajne existujú tri fázy zmien leukocytov frakciu krvi spojené s povahou lézií v pľúcnej tuberkulózy:

  1. Neutrofilné - fáza boja. V krvi sa zvyšuje podiel neutrofilov, v dôsledku čoho dochádza k posunu krvného vzorca doľava. Eozinofily nie sú prítomné, počet lymfocytov a monocytov je znížený. Lymfopénia je charakteristická pre progresívne formy tuberkulózy.
  2. Monocytová fáza je prekonanie infekcie. V krvi sa zvyšuje počet lymfocytov, krvný vzorec sa posúva doľava, počet neutrofilov sa znižuje, detekujú sa jednotlivé eozinofily.
  3. Fáza obnovy. Podiel lymfocytov a eozinofilov sa zvyšuje. Krvný obraz sa postupne normalizuje.

Toto rozdelenie do fáz odzrkadľuje len všeobecné krvné reakcie, ktoré neodrážajú zložitosť krvných reakcií na chronickú infekciu tuberkulózy.

Jadrový posun neutrofilov pri tuberkulóze.
Okrem kvantitatívnej skupiny má neutrofilná skupina kvalitatívnu charakteristiku, ktorá je oveľa tenšia a predtým naznačuje rôzne patologické procesy. Tuberkulóza dospelých, zvyčajne po primárnom procese, najčastejšie spôsobuje v krvi iba zvýšenie neutrofilov. Pri výrazných infiltrovaných pneumónnych formách a pri javoch rozpadu pľúcneho tkaniva je posun neutrofilov doľava značne odlišný a môže dosiahnuť až 20-30% bodnutia.

Pľúcny infiltrát bez dezintegrácie a fokálne formy tuberkulózy počas ich prvej detekcie alebo exacerbácie pri subfebrilovej teplote a miernych funkčných poruchách spôsobujú menej výrazný posun. V tomto prípade zostávajúce prvky hemogramu úplne nedajú odchýlky od normy. Preto dôkladné stanovenie jadrového posunu má diagnostický význam pri tuberkulóze.
Doktrínu jadrového posunu neutrofilov podporil Arneth na základe štúdie krvi na rôzne infekcie a najmä na tuberkulózu. Pri vykonávaní náročných výpočtov s mnohými náčrty si Arnet všimol určitú pravidelnosť v konfigurácii jadier neutrofilov. V krvi zdravého človeka sú neutrofily s neriedenými konstrikciami, neroztrieštené jadro (trieda I) 5%; neutrofily s dvomi segmentmi spojenými filiformnou konstrikciou (trieda II), 35%, trieda III 41%, IV. trieda 17% a trieda V 2%. Keď sú infekcie úmerné ich závažnosti, počet mnohých segmentovaných tvarov klesá, počet malých segmentovaných (2-3 segmentov) a nesegmentovaných foriem sa zvyšuje. V systéme Arnet je počet nesegmentovaných neutrofilov napísaný vľavo; vpravo je počet buniek triedy II, potom triedy III atď. Následkom toho s rastúcimi nesegmentovanými a málo segmentovanými formami sa počet buniek na ľavej strane obvodu zvyšuje a dochádza k "ľavému posuvu".

Znaky tuberkulózneho procesu, okrem zmien v hemograme, sú hyponatrémia. Je to najcharakteristickejší metabolický posun. Príčinou hyponatrémie je vývoj pľúcneho tkaniva postihnutého tuberkulózou antidiuretickou hormonálnou látkou. Obzvlášť intenzívne je táto látka vyrábaná počas obdobia rozšírených ceso-deštruktívnych foriem.

Rozbor moču.
Vylučovanie moču u pacientov s tuberkulózou je takmer normálne. Patologické zmeny v moči môžu byť, ak tuberkulóza postihuje obličky alebo močový trakt. V moči sa nachádza bielkovina, bielych krviniek, MBT. U pacientov s chronickými formami tuberkulózy kostí alebo príznaky amyloidózy môže byť identifikovaná (odolný prteinuriya, hrubý hematúria).

Diagnóza tuberkulózy analýzou krvi a moču

Prvky červenej krvi sa zvyčajne nemenia s tuberkulózou. Iba po akútnej strate krvi z pľúc alebo čriev môže byť anémia. Mierny pokles hladiny hemoglobínu možno pozorovať u chronických foriem fibro-kavernóznej pľúcnej tuberkulózy.

Jedným z indikátorov aktivity tuberkulózy je ESR (sedimentácia erytrocytov). Zrýchlil ESR koreluje nielen s dĺžkou aktuálne aktivity a čerstvé procesu, ale tiež so zhoršením chronického, najmä fibroznokavernoznyh, procesy.

Prvky leukocytovej frakcie krvi reagujú aktívnejšie na proces tuberkulózy.

Bežne existujú tri fázy zmien v leukocytovej frakcii krvi súvisiacej s povahou lézií pri pľúcnej tuberkulóze.

  1. Neutrofilná fáza boja. V krvi sa zvyšuje podiel neutrofilov, v dôsledku čoho dochádza k posunu vzoru doľava. Eozinofily nie sú prítomné, počet lymfocytov a monocytov je znížený.
  2. Monocytová fáza je prekonanie infekcie. V krvi sa zvyšuje počet lymfocytov, krvný vzorec sa posúva doľava, počet neutrofilov sa znižuje, detekujú sa jednotlivé eozinofily.
  3. Fáza obnovy. Podiel lymfocytov a eozinofilov sa zvyšuje. Krvný obraz sa postupne normalizuje.

Táto fázová separácia odráža iba celkovú krvnú reakciu.

Jadrový posun neutrofilov pri tuberkulóze

Okrem kvantitatívnej skupiny má neutrofilná skupina kvalitatívnu charakteristiku, ktorá je oveľa tenšia a predtým naznačuje rôzne patologické procesy.

Tuberkulóza dospelých je zvyčajne sekundárny proces, najčastejšie spôsobuje v krvi iba zvýšenie neutrofilov. Pri výrazných infiltrovaných pneumónnych formách a javoch pľúcneho rozpadu tkaniva je posun neutrofilov doľava pomerne odlišný a môže dosiahnuť až 20-30% bodnutia.

Pľúcne infiltrácie rovnaká nerozkladá, a fokálna TB počas prvého exacerbácie alebo identifikácie pri teplote subfebrile a len viditeľné funkčné poruchy poskytujú menej výrazný posun. Zároveň zostávajúce prvky hemogramu nemôžu vôbec odhaliť abnormality. Dôkladné stanovenie jadrového posunu je preto dôležité pri tuberkulóze.

Doktrínu jadrového posunu neutrofilov podporil Arnet (1905) na základe štúdie krvi pri rôznych infekciách, vrátane tuberkulózy.

Pri vykonávaní náročných výpočtov s mnohými náčrty si Arnet všimol určitú pravidelnosť v konfigurácii jadier neutrofilov. Krv zdravého človeka obsahuje:

  • 5% neutrofilov s neriedeným krkom, nesegmentovaného jadra (1. trieda);
  • 35% neutrofilov s dvomi segmentmi spojenými kontruktúrou (trieda II);
  • 41% neutrofilov s tromi segmentmi (stupeň III);
  • 17% neutrofilov so štyrmi segmentmi (stupeň IV);
  • 2% neutrofilov s piatimi segmentmi (trieda V).

Okrem segmentácie jadra Arnet zohľadnil aj svoj tvar. Takže pre triedu vymenoval niekoľko podtried na stupni depresie nesegmentovaného jadra. Ostatné triedy sú rozdelené na podtriedy v závislosti od tvaru segmentov.

Keď sú infekcie úmerné ich závažnosti, počet multisegmentovaných foriem sa znižuje, zvyšuje sa počet segmentov s nízkym segmentom (2-3 segmenty) a nesegmentovaných (relatívne mladých buniek). V systéme Arnet je počet nesegmentovaných neutrofilov triedy I uvedený na ľavej strane; vpravo je počet buniek triedy II, potom triedy III atď. Následkom toho s rastúcimi nesegmentovanými a mierne segmentovanými formami sa počet buniek na ľavej strane obvodu zvyšuje a dochádza k "ľavému posuvu".

rozbor moču

Vylučovanie moču u pacientov s tuberkulózou je takmer normálne. Patologické zmeny v moči môžu byť, ak tuberkulóza postihuje obličky alebo močový trakt.

Pacienti s chronickými formami pľúcnej tuberkulózy alebo kostí môžu mať príznaky amyloidózy.

35. Diagnostická hodnota štúdie krvi a moču u pacientov s tuberkulózou.

Krvný test Hemoglobín a erytrocyty vo väčšine prípadov zostávajú nezmenené, s výnimkou prípadov sprevádzaných akútnou stratou krvi. Indikátorom svedčiacim o prítomnosti aktívneho tuberkulárneho procesu je rýchlosť sedimentácie erytrocytov. Zrýchlená ESR je charakteristická nielen pre čerstvú aktívnu tuberkulózu, ale aj pre exacerbáciu chronického procesu. Zvyšné parametre krvného testu sa veľmi líšia v závislosti od povahy poškodenia pľúc. Zmeny periférnych parametrov. krv s tuberk. žiadna špecifickosť, ale hemogram pomáha diagnostikovať. fázových tuberk. spracovávať a hodnotiť závažnosť. jeho toku. Ľudia, ktorí boli vyšetrení u pacientov s tuberkulózou a tuberkulózou. pridelený obscheklin. krvný test s definíciou ESR obsahujúci eterr. a leukémie, koncentrácie hemoglobínu a počítanie leukocytového vzorca. Pacienti s tuberkulózou v prítomnosti pyémie sa odporúčajú. na určenie počtu retikulocytov na hodnotenie regenerátov. schopnosť kostnej drene, v diferenciálnych diagnostických prípadoch - obsah krvných doštičiek. Zmeny v hematológovi. indikátory závisia na jednej strane od lokalizácie, povahy a závažnosti inf. proces, na druhej strane, o stave organizmu, jeho kompenzačných rezervách. Hemogram har. skôr fázou procesu ako jeho klin. tvar. Napríklad u pacientov s rozsiahlymi deštruktívnymi formami tuberkulózy, s kompenzáciou procesu a neprítomnosťou čerstvého zápalu. zmeny v tvare krvi môžu byť normou. Exacerbácia rúrok. proces je obvykle sprevádzaný bodnutím neutrofilov, lymfopéniou a zvýšením ESR. Tot. počet bielych krviniek. väčšina pacientov je v normálnych hraniciach. Len akútny a závažný priebeh je charakterizovaný zvýšením obsahu leukocytov v krvi na 15 x 109 / l. Neutrofilný posun leukocytového vzorca doľava sa stáva významnejším. Keď tyazh.techenii ochorenia (najmä pri miliárnej tuberkulóza) reakcia sa môže vykonať leukemoid myeloidnej typu. Zastrešenie akútneho procesu spôsobuje normalizáciu uvedených zmien, výskyt lymfocytózy. Neutropénia a lymfocytóza sa môžu pozorovať pri chronickej hematogénne diseminovanej a fokálnej tuberkulóze.

rozbor moču. Pri analýze moču u pacienta s pľúcnou tuberkulózou nie sú žiadne značné abnormality. Zmeny sa prejavujú iba pri tuberkulóznych léziách obličiek a močových ciest. Rutinná analýza moču pre tuberkulózu je potrebná nielen v prípade podozrenia na poškodenie obličiek. V druhom. on je jediný. pre včasnú diagnostiku. Trvalá prítomnosť hnisu v moči, a čo je najdôležitejšie, tuba. baktérie, samozrejme, ukazuje na tubu. obličky. Niekedy sa to však vyžaduje. Issled. moču na zistenie patológov. nálezy; tak pre niektorých. formy tuberkulózy. analýza moču mesačne (diseminované formy, komplikovaný primárny komplex). Malé zmeny v moči vo forme stopy bielkovín, jednoduché. leukocyty a čerstvé erytrocyty môžu byť pravidelne detegované ako fenomén všeobecnej intoxikácie. Napokon niektoré reakcie s močom poskytujú indikáciu závažnosti procesu. Medzi nimi je vzhľad diagorovej reakcie vo všeobecnosti. formy tuberkulózy, najmä pri miliárnej tuberkulóze.

Nepochybne má prognostická hodnota v priebehu tuberkulózy urochromogénny účinok. Je to veľmi jednoduché a to je jeho veľká výhoda. Proizv. mark. cesta: odfiltrovaný moč a 10-krát zriediť. Vleje sa do dvoch skúmaviek, z nich je kontrola a pridá sa k inému roztoku manganistanu draselného v pomere 1: 1000. Ak sa získa pozitívny reakcie in vitro ostrom kanárikovo farbenie, ktoré odhalilo veľmi jasné, kedy v porovnaní s kontrolou. Je potrebné brať do úvahy iba dobre vyjadrené. farbu. Reakčný mechanizmus spočíva v tom, že manganistan draselný oxiduje v moči bezfarebný urochromogén, ktorý je významne zvýšený progresívnou tuberkulózou.

Aké sú testy na pľúcnu tuberkulózu?

Všetci pacienti dostanú laboratórne testy. Keďže patológia je nákazlivá voči ostatným, včasná štúdia biologického materiálu prispieva k presnosti diagnostiky a pomáha monitorovať priebeh liečby.

Zoznam laboratórnych testov na pľúcnu tuberkulózu

Zoznam testov na tuberkulózu

Zoznam povinných testov na pľúcnu tuberkulózu je nasledovný:

  • vyšetrenie sputa - v prítomnosti jaskýň, rýb, bielkovín, elastických vlákien, vápenatých solí sa v ňom nachádzajú;
  • analýza exsudátu - vykazuje neutrofily a endotelové bunky s prevahou leukocytov;
  • analýza bronchoalveolárnej laváže To znamená, znížené množstvo alveolárnych makrofágov s prudkým nárastom počtu neutrofilov s aktívnou TB počas procesu, a ak je v priebehu spánku metrík makrofágy mierne zvýšil;
  • sérologické testy, alebo enzýmovej imunoanalýzy na stanovenie sérových imunoglobulínov pre mykobakteriálne antigény. Pomer diagnostického titra protilátok k pôvodcovi ochorenia presahuje hodnotu 1: 8.

Čo ukazujú výsledky krvných testov?

Vzhľadom k biochemickú analýzu krvi v pľúcnych odborníkov tuberculosis majú možnosť určenia orientácie a proteínové zmeny a jeho frakcie v krvnom sére. To určuje formu a stupeň ochorenia. Úrovne kyseliny močovej, medi, cholesterolu a lyzozýmu sú prekročené. Je pozorovaná aktivita kreatínkinázy a enzýmu konvertujúceho angiotenzín. V dôsledku nižšieho pH a zvýšeného pCO2 sa vyvinula respiračná acidóza.

Pokiaľ ide o parametre hemoglobínu, ich zníženie, ktoré vedie k vzniku anémie, nie je typické pre tuberkulózu.

Rozbor moču u tuberkulóznych pacientov

Je test moču na pľúcnu tuberkulózu?

Vylučovanie moču u tuberkulóznych pacientov je normálne. Patologické zmeny sa zvyčajne vyskytujú vtedy, keď sú obličky a močové cesty zapojené do procesu tuberkulózy. U pacientov s chronickým ochorením sa počas štúdie môžu zistiť príznaky amyloidózy.

Čo ukazuje analýza moču pri pľúcnej tuberkulóze, aké informácie môžu naznačovať vývoj patologického procesu v tele?

  1. Hustota je 1,015 až 1,025.
  2. Jediná prítomnosť červených krviniek je povolená u detí - nie viac ako 5.
  3. Leukocyty by nemali byť viac ako 2 jednotky, pre ženy a dievčatá - až 5 jednotiek.
  4. Hodnoty soli by nemali byť významné.
  5. Prípustná hodnota plochého epitelu je až 5 jednotiek.

Čo ukáže krvný test na pľúcnu tuberkulózu

Tuberkulóza je nebezpečná a komplikovaná choroba pri liečbe. Účinnosť liečby závisí od toho, ako bola včas odhalená. Nikto nie je imúnny voči infekcii, absolútne každý môže ochorieť - dospelí, deti, starší ľudia.

Pri absencii potrebnej včasnej liečby uzavretá forma ide do nebezpečné otvorené, preto je diagnostika v počiatočných štádiách ochorenia mimoriadne dôležitá a to môže byť dosiahnuté pravidelnými a komplexnými prieskumami.

V tomto článku sa budeme zaoberať rôznymi metódami diagnostikovania tejto pľúcnej choroby a tiež sa pokúsime zistiť, ktorý krvný test na pľúcnu tuberkulózu je najspoľahlivejší a informatívnejší.

Keď je potrebné skontrolovať tuberkulózu

Takže prieskum je potrebný, keď:

  • kontakty s nosičmi choroby;
  • všeobecná slabosť;
  • zníženie hmotnosti;
  • zvýšenie teploty vo večerných hodinách;
  • chronický kašeľ.

Osobitne dôležité je včas určiť prítomnosť tuberkulózy v detstve, pretože u detí je veľmi pravdepodobné, že infekcia spôsobí ďalšie patologické procesy v tele.

Dôležité! Jednou z preventívnych opatrení je vakcinácia BCG na 4 dni život dieťa a v 7-ročný vek. Telo dieťaťa je slabšie ako dospelá osoba, preto je dôležité chrániť ho pred infekciou a očkovať.

Štúdie o podozrení na tuberkulózu

Tuberkulózu možno identifikovať niekoľkými spôsobmi.


Foto 1. Fragment röntgenového vyšetrenia hrudníka pacienta s tuberkulózou. Fluorografia je jednou z najspoľahlivejších metód diagnostiky tohto ochorenia, ale je najúčinnejšia v oddelení s ostatnými. Napríklad podrobný krvný test ukáže tuberkulózu už v počiatočnom štádiu.

  1. Röntgenové vyšetrenie.Vyhodnotenie stupňa poškodenia pľúc pomôže fluorografii. Treba však mať na pamäti, že počiatočné štádiá vývoja choroby nebudú viditeľné na röntgenových snímkach. Skúška by mala byť komplexná. Pre úplnejšie vyšetrenie musia byť pľúca pacienta fotografované zozadu aj zozadu.
  2. Tuberkulínový test. Pri vyšetrení detí sa najčastejšie používa tuberkulínový test (Mantouxova reakcia). Tuberculin je zmes bielkovín izolovaných z mŕtvych patogénov. Zavedenie lieku pod kožu spôsobuje reakciu na imunitu, ktorá sa prejavuje rôznymi spôsobmi. Ak v organizme nie sú žiadne patogény, potom pár dní po injekcii bude sotva viditeľná stopa. Ak sa miesto vpichu vzorky alebo vznik vredu zahubí, pravdepodobnosť infekcie pacienta je vysoká.

Dôležité! Reakcia Mantouxu neumožňuje určiť prítomnosť tuberkulózy so 100% pravdepodobnosťou, ale pomôže určiť rizikovú skupinu pre túto chorobu. S opatrnosťou je vhodné vyskúšať tých, ktorí trpia alergiami. Zavedenie zloženia orgánu môže reagovať nepredvídateľným spôsobom.

  1. študovaťmoča krv. Výsledky pomáhajú zistiť stopy patogénu. Pridelené na identifikáciu konečnej diagnózy a rozsahu ochorenia.
  2. štruktúraspútum. Prítomnosť mykobaktériovej tuberkulózy umožňuje určiť a študovať spút. Materiál vykazuje prebytok normy proteínu, ktorý ho odlišuje od bronchiálneho spúta, ako aj patogénov infekcie.

Je možné stanoviť tuberkulózu pomocou krvného testu

štruktúra erytrocyty (červené krvinky) v prítomnosti baktérií sa zanedbateľne mení. Akútne črevné alebo pľúcne krvácanie vyvolávajú anémia, významný zníženie hemoglobínu.

Existujú ľudia, ktorí majú pochybnosti o tom, či je možné určiť tuberkulózu analýzou krvi. V skutočnosti je všeobecná analýza schopná rozpoznať vývoj zápalových a patologických procesov v tele zvýšená miera ESR. Zvýšený index indikuje nielen aktivitu a trvanie súčasného zápalu, ale aj exacerbáciu chronických, najmä v konečných štádiách ochorenia.


Foto 2. Lekár vykoná postup na odber krvi z žily pacienta pomocou striekačky. Potom sa vykoná krvný test s tuberkulózou, ktorej indikátory indikujú zápalové procesy.

Dôležité! Úroveň ESR sa môže zameniť s indikátormi zápalu alebo rakoviny pľúc. V tomto prípade je potrebné vyšetriť počet eozinofilov (jeden z typov leukocytov). Ak zvýšená eozinofilov a WBC ukazuje náhle zmeny v krvnom testom, to sa stane s tuberkulózou, a rozhodol sa zápalom pľúc.

Sú klinické a biochemické krvné testy presné?

Klinický krvný test na pľúcnu tuberkulózu je často nedostatočný na diagnostiku tuberkulózny bacil. Potom je potrebné ďalšie komplexné vyšetrenie. To isté sa dá povedať o biochemickom krvnom teste. Pri tuberkulóze počiatočného štádia alebo latentnej formy sa s najväčšou pravdepodobnosťou nezaznamená žiadne abnormality. A len pri akútnych formách ochorenia sa zníži koeficient albumín-globulín.

Typy krvných testov na protilátky proti tuberkulóze

Existujú presnejšie, hlbšie ako metódy krvného testovania krvi, ktoré umožňujú identifikovať tuberkulózu. Ako zistiť takéto krvné testy, máte ochorenie, budeme ďalej zvažovať.

Stanovenie objektívnej diagnózy je možné pomocou prístupov polymerázovou reťazovou reakciou (PCR) a enzýmová imunoanalýza (ELISA).

Vykazuje ELISA prítomnosť tuberkulózy

S pomocou IFA odhaľuje prítomnosť patogénov u pacienta. Metóda je vhodná, pretože umožňuje súčasne preskúmať veľké množstvo vzoriek. Má však nízku citlivosť a odporúča sa na použitie v oblastiach s nízkou mierou výskytu.

Aké zmeny prináša metóda PCR?

metóda PCR sa týka najproduktívnejších. Používa sa na zistenie choroby, určenie závažnosti a remisie pri liečbe pomocou nájdenia DNA mikrobaktérií.

PCR sa používa pre:

  • detekcia progresívneho bodnutia Kocha;
  • test na detekciu extrapulmonárnej tuberkulózy;
  • rýchle zriadenie ohniskov lokalizácie infekcií;
  • diagnóza recidívy choroby;
  • monitorovanie priebehu liečby.

A to a ďalší krvný test na protilátky proti tuberkulóze sa považujú za dostatočne spoľahlivé. Ale existujú aj iné.

Alternatívne metódy krvného testu

Menej ako PCR a ELISA sú bežné pre detekciu patogénnych mikrobaktérií Testy uvoľňovania interferónu gama. Môže sa vykonať namiesto tuberkulínového testu. Reakcia ukazuje tvorbu gama-interferónu v reakcii na zavedenie mikrobaktérií. Výsledky môžu presne určiť prítomnosť infekcie.

Ďalšou alternatívnou metódou výskumu je QuantiFERON-TB Gold. Táto metóda sa najčastejšie používa na testovanie detí, ktoré majú závažné alergické reakcie na tuberkulínový test.

Dôležité! Obe metódy neumožňujú určiť stupeň vývoja infekcie - aktívny alebo latentný.

Ošetrujúci lekár určuje, ktorý typ krvného testu sa použije. Najčastejšie sa štúdia uskutočňuje komplexným spôsobom. Analýza krvi v latentnej forme tuberkulózy vo všeobecnosti nemôže poskytnúť výsledky.

Ako sa výsledky krvných testov dekódujú?

Pri interpretácii celkového krvného testu stojí za to venovať pozornosť hladine ESR, hemoglobínu, leukocytov.

Úroveň ESR zdravý človek bude mať menej ako 50 jednotiek, prebytok tohto indikátora naznačuje zápalový proces v tele.

Počet leukocytov v krvi pacient s tuberkulózou 6 v 10 9 / liter, v akútnych a ťažkých prípadoch ochorenia - 12-15 až 10 9 / l.

Zloženie červených krviniek väčšina pacientov zostáva normálna. Nízky hemoglobín je fixovaný miliárdou tuberkulózou, kazutickou pneumóniou.

Akútne, progresívne a komplikované formy zmeny ochorenia leukogram. V niektorých prípadoch mierna leukocytózaaž 10 000 - 15 000 bielych krviniek), menej často leukopénia.

Bez ohľadu na to, čo robíte krvný test na pľúcnu tuberkulózu, dešifrovanie je prácou skúsených odborníkov. Iba oni môžu presne určiť, koľko tuberkulózy sa spustí, ak sa nájde. Analýzy ELISA a PCR sa dešifrujú rovnako. Pri špeciálnych formách je negatívny alebo pozitívny výsledok oproti detekovanej infekcii.

Druhy testov na liečbu

Obtiažnosť liečby spočíva v tom, že infekcia sa môže stať stabilný na akékoľvek antibiotiká, najmä v pokročilých štádiách, ako aj dlhodobé inkubačné obdobie, počas ktorých nie je možné určiť infekciu.

Po identifikácii a predpisovaní vhodnej liečby sa proces obnovy monitoruje v pravidelných intervaloch 1-2 krát za mesiac. Pacient dáva krv a hlien.


Foto 3. Lekársky stôl v ordinácii lekára po zberu spúta od pacienta. Vzorky spúta sú uzavreté v plastových skúmavkách a čakajú na laboratórne testy.

Všeobecný krvný test, Mantouxov test, fluorografia je možné vykonať takmer v akomkoľvek zdravotnom stredisku, a to okamžite, ak dôjde k podozreniu. Na základe zistení terapeut urobí záver o neprítomnosti patologické zmeny v tele alebo poskytnúť pokyny na ďalšie vyšetrenie v nemocničnom zariadení.

Špecializované a presnejšie štúdie sa vykonávajú v roku 2008 Výdajne na tuberkulózu, ktoré sú vybavené laboratóriami a potrebnými reagenciami pre výskum.

Takže, sumarizujem vyššie uvedené:

  • tuberkulóza nebezpečného ochorenia, čo je mimoriadne dôležité na časové odhalenie;
  • zvýšenie ESR, blackout v pľúcach, zmena leukogramu poskytnúť základ na poslanie pacienta na ďalšie vyšetrenie na identifikáciu infekcie;
  • liečba sa vykonáva s pomocou antituberkulózne lieky; Intenzívna fáza liečby pokračuje až do dosiahnutia pozitívnej dynamiky klinických a rádiologických ukazovateľov.

Užitočné video

Ponúkame sledovanie videa, ktoré tiež odpovedá na otázku, či je možné identifikovať tuberkulózu analýzou krvi. Popisuje kvantitferonový test QuantiFERON TB Gold, ktorý ukazuje tuberkulózu v krvnom teste pre imunitnú odpoveď.

Dekódovanie všeobecného krvného testu na tuberkulózu u dospelých a detí

Infekcia s tuberkulóznym bacilom už nie je trestom pre osobu. Moderná medicína používa účinné nástroje na boj proti tejto chorobe, ak je zistená v ranom štádiu. Včas na detekciu patológie pomáhajú pravidelné preventívne vyšetrenia a testy vrátane všeobecného krvného testu na tuberkulózu.

Zmena klinického obrazu

Celkový krvný test na pľúcnu tuberkulózu (UAC) nemá žiadne špecifické prejavy. Markery hovoriace o vývoji tuberkulózy a určenie štádia ochorenia neexistujú. Ale pre nešpecifické príznaky je možné posúdiť skrytý zápalový proces a podozrenie na zmeny v pľúcach.

Odchýlka erytrocytov od normálu

S pomalou formou alebo lokalizovanou léziou sa počet červených krviniek v krvi nezmení, ale ich farba sa mení. Úroveň hemoglobínu v červených krvinkách klesá. Tento stav sa nazýva hypochrómia.

S významnými infiltračnými léziami pľúcneho tkaniva klinický krvný test ukazuje zníženie počtu červených krviniek a pokles ich veľkosti. Vznikajú nezrelé bunky - retikulocyty, ktoré sú "prekurzormi" červených krviniek. V počiatočnom štádiu tuberkulózy množstvo retikulocytov nepresahuje 0,5%.

Závažná anémia je častejšia u dospelých s pokročilou formou tuberkulózy. V tomto prípade sa počet retikulocytov zvyšuje na 1% z celkového počtu červených krviniek.

Posun leukocytového vzorca

Leukocyty ako bunky imunitného systému sú v prvom rade zapojené do odpovede na ochorenie. Všeobecná analýza krvi a štúdium leukogramov určujú prítomnosť zápalového procesu a jeho štádia.

V nekomplikovanej uzavretej forme dochádza k výraznému zvýšeniu počtu neutrofilov - bielych krviniek zodpovedných za boj proti bakteriálnej infekcii. Vyskytujú sa promyelocyty - nezrelé leukocytové bunky, ktoré sa normálne nevyskytujú.

Predĺžená a závažná pľúcna tuberkulóza je sprevádzaná degeneratívnymi zmenami v neutrofiloch, vznikom patologickej granularity. Počet eozinofilov prudko klesá. Zaznamenáva sa lymfopénia - zníženie počtu lymfocytov. Všetky tieto príznaky naznačujú dlhotrvajúci zápalový proces, sprevádzaný tvorbou hnisových a nekrotických hmôt.

Zmena v ESR

Na stanovenie tuberkulózy v aktívnej fáze pomáha ESR - indikátor rýchlosti sedimentácie erytrocytov. Vážení červených krviniek a ich rýchle zrážanie uľahčuje adhézia imunoglobulínov, fibrinogénu. Normálne tieto hladiny krvi u mužov nepresahujú 10 mm / h, u žien - 15 mm / h. Zrýchlenie ESR až do 80 mm / h znamená aktiváciu zápalového procesu v tele.

Vlastnosti indikátorov u detí

Analýza krvi na tuberkulózu u dieťaťa sa významne nelíši od zmien u dospelých. Dekódovanie výsledku sa vykonáva pre tie isté ukazovatele:

  • V počiatočnej fáze ochorenia sa vzorka erytrocytov zanedbateľne mení. Anémia sa môže zistiť len vtedy, keď je forma deštruktívna. V iných prípadoch zostáva počet červených krviniek nezmenený, zatiaľ čo percento nezrelých erytrocytov sa zvyšuje. Tuberkulóza u detí je podozrivá, ak je detekovaný retikulocyt nad 1 ppm.
  • Ukazovatele leukocytov tiež prechádzajú zmenami. Vyvoláva leukocytózu - zvýšenie celkového počtu bielych krviniek v dôsledku neutrofilov a počet lymfocytov je výrazne znížený. Pri norme pre deti staršie ako 6 rokov 40%, počet lymfocytov pri tuberkulóze nie je väčší ako 20%.

V počiatočných štádiách ochorenia narastá počet eozinofilov, ktoré reagujú na nástup alergickej reakcie. Prudký pokles znamená, že proces prechádza do aktívnej fázy.

  • V detstve ESR nepresahuje 10 mm / h. Zrýchlenie na 50 mm / h naznačuje mobilizáciu obranyschopnosti tela na boj proti zápalovému procesu.

U dieťaťa často začína štádium ochorenia bez zjavných symptómov alebo maskovania v rámci ARVI.

Zmeny závisia od štádia ochorenia

Je možné stanoviť prítomnosť zamerania na tuberkulózu pomocou laboratórneho krvného testu? Bohužiaľ nie. Všeobecný krvný test na tuberkulózu je schopný odhaliť zápalový proces iba v určitých štádiách ochorenia.

  1. V štádiu infiltrácie ľahko reagujú leukocyty a ESR sa zvyšuje.
  2. V štádiu rozpadu sa vyskytujú výrazné zmeny vo forme leukocytov a erytrocytov.
  3. Rozložená forma počas analýzy prinesie výraznejšie vyššie uvedené odchýlky.
  4. Keď sa zápalový proces utíši alebo sa zotaví, červená krv sa vráti do normálu, počet a pomer leukocytov sa obnoví.
  5. Neaktívna forma pľúcnej tuberkulózy vo všeobecnom vyšetrení krvi nie je zistená.

Kľúčom k úspešnej liečbe je včasná detekcia tuberkulózy a všeobecný krvný test je metóda, ktorá umožňuje včas rozpoznať nástup latentného zápalového procesu. A hoci sa analýza nepovažuje za špecializovanú metódu výskumu, môžu v krátkej dobe spájať veľké množstvo ľudí. Pri identifikácii abnormalít v typickom klinickom zobrazení je priradená špecifická analýza tuberkulózy a fluorografie.

Kto povedal, že je nemožné vyliečiť tuberkulózu?

Tie boli diagnostikované s tuberkulózou. Vyplníte všetky predpisy lekára, ale nie je tam žiadne zotavenie. Z hŕstky piluliek žalúdok bolí, sleduje slabosť a apatia? Možno je čas, aby ste zmenili prístup k liečbe.

Lekári nemôžu prekonať hlavnú príčinu svojej choroby. Prečítajte si príbeh Eleny, ktorý dokázal poraziť tuberkulózu bez ohľadu na to, čo. Prečítajte článok >>

Ukazovatele ESR pri tuberkulóze

Podľa štatistiky je tuberkulóza najčastejšou chorobou medzi ľuďmi. Najčastejšie toto ochorenie postihuje deti a nízkopríjmové segmenty obyvateľstva. Stojí za zmienku, že každý rok sa zdvojnásobuje percento chorých. V súvislosti s tým sa vyvíjajú nové lieky a metódy na liečbu tuberkulózy.

Hlavným faktorom, ktorý prispieva k rozvoju tuberkulózy, je zníženie imunity, ktoré môže byť spôsobené znečistením životného prostredia. Diagnózu tejto choroby je možné vykonať pomocou testov a mnohými inými spôsobmi.

Analýza krvi na tuberkulózu je hlavným ukazovateľom na určenie ochorenia u ľudí. Tuberkulóza je nebezpečná infekčná choroba. Stojí za zmienku, že v omnoho zanedbanejšom štádiu je choroba veľmi ťažké liečiť, preto je veľmi dôležité včas zaznamenať chorobu a začať správnu liečbu v nemocnici.

Spôsoby kontrahovania tuberkulózy

Ochorenie má mechanizmus prenosu kvapiek vzduchu. Tak môže dôjsť k infekcii v dôsledku získania patogénu do tela cez sliznicu. Okrem toho sa tuberkulóza môže prenášať od chorých matky na vyvíjajúci sa plod.

Takmer vo všetkých prípadoch tuberkulóza pôsobí na dýchaciu sústavu. Podiel extrapulmonálna ochorenie (postihujúce tráviaci systém, centrálny nervový systém, porušuje zrakové funkcie, kĺby, močové a pohlavné sústavy).

Hlavným zdrojom choroby je mykobaktérium - Kochova tyčinka. Ovplyvňuje pľúca, kožu, kosti a mnoho ďalších orgánov. Tuberkulóza môže spravidla viesť k invalidite alebo dokonca k smrti človeka. Avšak ak je ochorenie diagnostikované čo najskôr, potom je celkom prístupná k liečbe.

Ukazovatele ESR pri tuberkulóze

Krvný test na definíciu tuberkulózy ukazuje klinický priebeh zápalového procesu. Bežne je miera sedimentácie erytrocytov: u mužov 1-10 mm / h, u žien 2-15 mm / h.

Príčinný činiteľ, ktorý sa dostáva do ľudského tela, spôsobuje poškodenie tkanív a orgánov rôznych systémov. Zahŕňa meniace sa ukazovatele krvi. Takže keď sú infikované tyčinkami, pozoruje sa veľmi silné zvýšenie rýchlosti sedimentácie erytrocytov. Tiež sa zvyšuje počet bielych krviniek, pretože zápalový proces prebieha v tele.
Tuberkulóza spravidla nespôsobuje významné zmeny erytrocytov. Vývoj malej anémie a nízkeho hemoglobínu sa môže rozvinúť iba pri výraznej strate krvi. Preto je tuberkulóza sprevádzaná prebytkom ESR oveľa vyššou ako normálna hodnota.

príznaky

Medzi hlavné príznaky tuberkulózy patrí:

  1. Zvýšená telesná teplota;
  2. Nočné potenie;
  3. Výskyt dýchavičnosti;
  4. Suchý, silný kašeľ s hlienom (môžu byť prítomné krvné pruhy);
  5. Všeobecná únava;
  6. Ostrý úbytok hmotnosti;
  7. Rýchla únava;
  8. letargia;
  9. agresivita;
  10. Nedostatok chuti do jedla;
  11. Bolesť v hrudi.

Deti, na rozdiel od dospelých, sú najviac náchylné na tuberkulózu. Preto je potrebné pravidelne vyšetrovať svoje dieťa a vykonať test na identifikáciu Kochovho prútika. Včasná diagnóza umožňuje dosiahnuť pozitívny výsledok bez vážnych následkov.

Niektorí ľudia majú silný imunitný systém. V tomto prípade sa príznaky choroby začínajú objavovať až v neskorých štádiách. S oslabenou imunitou sa na začiatku ochorenia objavujú príznaky.
Tuberkulóza sa rozvíja pomaly a postupne:

  • Primárny formulár.
    Vyvinie sa ihneď po infekcii. Hlavnými príznakmi v tejto fáze sú rozšírenie lymfatických uzlín.
  • Latentná (skrytá forma).
    Začiatok ochorenia sa vyznačuje absenciou symptómov. Ďalej sa objavujú vo forme špecifických bolesti počas dýchania a kašľa, nedostatku chuti do jedla, nadmerného potenia, rýchlej únavy. Takáto forma môže byť považovaná za neinfekčnú.
  • Otvoriť formulár.
    Najzávažnejšia forma ochorenia. Na liečbu je potrebné ochraňovať chorého od ostatných v uzavretých zdravotníckych zariadeniach. Je to nevyhnutné na zabezpečenie bezpečnosti okolitých ľudí.
  • Sekundárna forma.
    Pozoruje sa v dôsledku opakovanej infekcie.

Diagnóza tuberkulózy

Detekcia ochorenia je komplikovaná v dôsledku podobnosti prvých symptómov s chronickou bronchitídou. Vedúcu úlohu pri diagnostikovaní tuberkulózy zohrávajú včasné testy od potenciálnych pacientov. Takže ak je pacient podozrivý z tuberkulózy, vyšetrenie spúta sa vykonáva. Za týmto účelom sa zhromaždí v priebehu dňa spúta a odošle sa do laboratória na detekciu mykobaktérií.

Stojí za zmienku, že diagnóza tuberkulózy má iné metódy na vyšetrenie pacientov.

Najefektívnejšie spôsoby na diagnostiku ochorenia sú:

  1. B / x krvný test;
  2. rozbor moču;
  3. Analýza spúta;
  4. Mantoux test, Pirke;
  5. CT skenovanie (počítačová tomografia);
  6. Sérologické vyšetrenie krvi (ELISA, PCR);
  7. bronchoskopia;
  8. biopsia;
  9. Pleurálna prepichnutie;
  10. röntgen hrudníka;
  11. Skiaskopie.

Treba poznamenať, že tuberkulóza je sprevádzaná zvýšením koncentrácie cholesterolu, lyzozýmu, kyseliny močovej a Cu v sére. Na tomto základe môžu byť všetky zmeny v tuberkulóze veľmi špecifické.

Každá forma ochorenia sa vyznačuje prietokom, závažnosťou, diagnózou a liečbou. Preto keď sa objavia prvé príznaky, mali by ste okamžite konzultovať s lekárom a nemali by ste si samé lieči. Vzhľadom k tomu, že môžete len zhoršiť situáciu a zhoršiť váš stav.

V súčasnosti existuje veľa liekov, ktoré účinne bojujú proti pôvodcovi tuberkulózy. Vedúcu úlohu pri ozdravení človeka zohráva včasná diagnostika a kompetentná liečba. Všeobecný stav pacienta tiež závisí od procesu obnovy po ochorení. Ak sa teda dodržiavajú všetky lekárske odporúčania, riziko reinfekcie sa môže znížiť.

Laboratórna diagnostika tuberkulózy

Tuberkulóza je choroba, ktorú možno ľahko diagnostikovať v moderných podmienkach a vedeckých úspechoch. Laboratórna diagnostika tuberkulózy je ústredná pre iné diagnostické metódy, druhá len pre röntgenové metódy výskumu.

Klinický krvný test

U pacientov s tuberkulózou nie sú zmeny vo všeobecnej analýze krvi patognomické. S ohľadom na obmedzené a inaktívnych foriem tuberkulózy hypochromia charakteristiku erytrocytov v normálne množstvo. Keď masívne infiltráty alebo kazeózna pneumónie, zatiaľ čo prevalencia kazeózna lymfadenitída špecifických črevných lézií, rovnako ako pre veľké pľúcne alebo pooperačného krvácania a poznámka erythropenia mikrocytózy, oligohromaziyu, polihromaziyu. Makrocytóza a najmä poikilotsitoz sa stretávajú oveľa menej často, zvyčajne s ťažkou anémiou. Počet retikulocytov v kroku tuberkulózy kompenzovaná v rozmedzí od 0,1 do 0,6%, s subcompensated - od 0,6 do 1,0% a 1% je charakterizovaná dekompenzovaných retikulocytov.

Keď tuberkulóza v niektorých prípadoch môže byť mierny leukocytóza (až 15 tisíc leukocytov.), Menej žiarenia, ktoré sa vyskytujú v 2-7% pacientov s obmedzenými a ľahko foriem procesu sa vyskytujúce a v 12,5% - deštruktívne a progresívne pľúcnej tuberkulózy,

Najčastejšie posuny sa vyskytujú vo vzorci leukocytov. Označte relatívnu a absolútnu neutrofiliu, mierny posun leukocytového vzorca doľava pred promyelocytmi. Myelocyty sú veľmi zriedkavé v prípade nekomplikovanej tuberkulózy. Zvýšenie počtu neutrofilov s abnormálne zrna u pacientov krvného obrazu TB vždy udáva dĺžku procesu: u pacientov s ťažkou tuberkulózou takmer všetky neutrofily obsahujú abnormálne obilia. Po skončení vypuknutia tuberkulózy sa jadrový posun pomerne rýchlo približuje normálu. Patologická granularita neutrofilov zvyčajne pretrváva dlhšie ako iné zmeny na hemograme.

Obsah eozinofilov v periférnej krvi sa tiež mení v závislosti na procese a fázu alergický stav organizmu. Ich počet sa znižuje až do aneozinofiliya na ťažkú ​​a dlhodobú ohniská nákazy a naopak sa zvyšuje, ako sa resorpcia infiltrátmi a pleurálny výpotok, ako aj skoré formy primárnej tuberkulózy.

Väčšina foriem primárnej tuberkulózy sprevádza lymfopénia, ktorá sa niekedy pozoruje už niekoľko rokov, dokonca aj po zjazvení špecifických zmien. Sekundárna tuberkulóza vo fáze exacerbácie môže v závislosti od závažnosti procesu sprevádzať buď normálny počet lymfocytov, alebo lymfopénia.

To zaujíma osobitné miesto určujúci rýchlosť sedimentácie erytrocytov Ďalšie testy pre vyhodnotenie tuberkulóznej proces (ESR), ktorý má hodnotu v hodnotení procesu tuberkulózy toku a identifikáciu jeho aktívnej formy. Zvýšenie ESR indikuje prítomnosť patologického procesu (infekčné protizápalové, hnisavé septický, hemoblastózy, Hodgkinovho a kol.), A svedčí o jeho závažnosti, ale normálne hladiny ESR nie vždy ukazujú neprítomnosť patológie. Zrýchlenie sedimentácie erytrocytov prispieva k zvýšeniu hladiny globulínov, fibrinogénu, cholesterol, a znižuje viskozitu krvi. Pomalá sedimentácia charakteristika podmienok sprevádzaná hemokoncentrácii zvyšuje obsah albumínu a žlčových kyselín.

Hemogram u pacientov s tuberkulózou sa mení počas liečby. Hematologické posuny zmiznú rýchlejšie, čím úspešnejšia je terapeutická intervencia. Treba však mať na pamäti vplyv rôznych antibakteriálnych liekov na hemopoézu. Často spôsobujú eozinofíliu, v niektorých prípadoch - leukocytóza, leukopénia a často až do agranulocytózy a lymfatické retikulárne reakcie. Systematická kontrola hematológie a správne analýzy údajov sú potrebné pre posúdenie klinického stavu pacienta a účinnosť procesu dynamiky aplikovať liečbu.

Klinická analýza moču

Pri tuberkulóze močového systému je analýza moču hlavnou laboratórnou diagnostickou metódou. Môžete pozorovať leukocyturia, erytrocytúria, proteinúriu, hypoizostenúriu, tuberkulózu mykobaktériu, nešpecifickú bakteriúriu.

Leukocytúria - najčastejším príznakom tuberkulózy močového systému pred chemoterapiou a neexistuje žiadna špecifická len vo výnimočných prípadoch, ako je napríklad kompletná obliteráciu lumen močovodu. Nechyporenko test (stanovenie počtu leukocytov v 1 ml moču) pomáha objektívnejšie posúdiť stupeň leukocytúria nefrotuberkuloze s, a v niektorých prípadoch ju určiť normálnu vyšetrenie moču. Musíme však mať na pamäti, že leykotsitouriya môže byť akútna a chronická pyelonefritída, cystitída, uretritída, kamene v obličkách a močovodov.

Eritrotsiturii. ako aj leukocyturia. sú považované za jeden z najčastejších laboratórnych príznakov tuberkulózy močovej sústavy. Frekvencia hematúrie závisí od rozšírenia procesu, zvyšuje sa v dôsledku vývoja deštruktívnej tuberkulózy v obličkách. Erytrocytúria bez leukocytúrie je typickejšia v počiatočných štádiách tuberkulózy obličiek. Hematúria, ktorá prevažuje nad leukocytúriou, je dôležitým argumentom v prospech tuberkulózy obličiek v jej diferenciácii s nešpecifickou pyelonefritídou.

Biochemický krvný test

Pri tuberkulóze závisia zmeny v niektorých biochemických parametroch predovšetkým od fázy procesu, komplikácií a rôznych sprievodných ochorení. U pacientov s inaktívnou tuberkulózou pľúc a iných orgánov sa celkové proteínové a proteínové frakcie krvného séra nezmenili a určili ich normálny obsah.

Pri akútnych formách ochorenia, ako aj pri exacerbácii a progresii chronických foriem tuberkulózy sa znižuje koeficient albumín-globulín.

Esenciálne v posúdení funkčného stavu organického poškodenia a pečene u tuberkulózy a jej komplikácií je stanovenie celkového sérového a priameho bilirubínu, AST (ACT), alanínaminotransferázy (ALT). Dynamické stanovenie hladiny aminotransferáz. bilirubín v liečbe pacientov s tuberkulózou, najmä u ťažkých foriem - povinnú súčasť biochemického vyšetrenia pacientov s tuberkulózou a je vedený na mesačnej báze.

Hodnotenie funkčného stavu obličiek zahŕňa stanovenie sérového kreatinínu a výpočet rýchlosti glomerulárnej filtrácie podľa vzorca Cockcroft-Gault. Výpočet rýchlosti glomerulárnej filtrácie pomocou Reberovej vzorky poskytuje menej presné výsledky.

Hlavným cieľom dynamických biochemických štúdií pacientov s tuberkulózou je monitorovanie priebehu procesu, včasná detekcia vedľajších účinkov liekov a adekvátna korekcia vzniknutých homeostatických porúch.

Aplikácia biochemických metód vyšetrenia pri extrapulmonárnej tuberkulóze

Najvýznamnejším ukazovateľom je obsah kyseliny tuberkulostearovej v biologických kvapalinách, ale jeho definícia súvisí s technickými ťažkosťami (potreba plynovej chromatografie a hmotnostnej spektrometrie).

Potenciálne meranie aktivity adenozín deaminázy - enzýmu stanoveného v kvapalinách: synoviálna, perikardiálna, ascitická alebo spinálna. Hlavnými výrobcami adenozín deaminázy sú lymfocyty a monocyty. Stanovenie adenozín deamináza aktivity v biologických tekutinách uľahčuje diagnózu tuberkulóznej synovitída, tuberkulóza lymfatických uzlín, tuberkulózne meningitídy, tuberkulózne serozity.

Niektoré biochemické indikátory kvôli ich nespecificite sa určujú iba v biologických tekutinách, ktoré sú blízko k zameraniu lézií. Zmerajte úroveň indikátorov ako reakciu na subkutánnu alebo intradermálnu injekciu tuberkulínu (zvyčajne pred a 48 a 72 hodín po nej). Potom sa vypočíta stupeň zvýšenia úrovne markerov (v%) vzhľadom na počiatočnú úroveň.

Optimálne stanovenie aktivity orgánovo špecifického enzýmu transamidázy v moči, ktorého výskyt sa zaznamená, keď sú ovplyvnené obličky rôznej povahy. Štúdium transamidázy je odôvodnené len za podmienok subkutánnej injekcie tuberkulínu, aby sa exacerboval lokálny zápalový proces. Určite aktivitu transamidínu v moči na začiatku a 24-72 hodín po zavedení 50 TE tuberkulínu. Rozšírenie fermentácie dvakrát a viac umožňuje v 82% prípadov rozlíšiť aktívnu tuberkulózu obličiek od exacerbácie chronickej pyelonefritídy.

Pri tuberkulóze ženských pohlavných orgánov sa v podmienkach provokatického tuberkulínového testu určujú koncentrácie haptoglobínu a malónového dialdehydu v krvi. Subkutánne injikovaný tuberkulín v dávke 50 TE a po 72 hodinách vykonal druhú biochemickú štúdiu. V prípade etiológie tuberkulózy nie je stupeň zvýšenia hladiny haptoglobínu nižší ako 28% a úroveň malondialdehydu je 39% alebo viac. Určuje sa tiež aktivita adenozín deaminázy v peritoneálnej tekutine získanej z priestoru Douglas. Prúžok sa znovu preskúma 72 hodín po intradermálnej injekcii tuberkulínu v dávkach 0,1 TE a 0,01 TE do projekcie vnútorných pohlavných orgánov na prednej brušnej stene. V prospech tuberkulózneho procesu je zvýšenie aktivity adenozín deaminázy o 10% alebo viac v porovnaní s pôvodnou.

Keď je postihnuté oko, skúma sa ohniská reakcia, ktorá sa vyskytuje v oku v reakcii na antigénnu stimuláciu. Je nežiaduce vyvinúť výraznú odpoveď sprevádzanú znížením vizuálnych funkcií. Keďže hodnotenie minimálnych ohniskových reakcií je často ťažké, na účely objektivizácie záveru sa odporúča paralelné zameranie a stupeň rastu haptoglobínu alebo adenozín deaminázy v krvnom sére.

Všetky biochemické štúdie by sa mali vykonať v spojení s inými metódami.

Výskum v systéme zrážania krvi

Význam stave výskumu tohto systému zrážania krvi TBC je spôsobená prítomnosťou radu pacientov s pľúcnou tuberkulózy hemoptýzou alebo pľúcne krvácanie, rovnako ako hemokoagulačných komplikácií v chirurgickej liečbe tuberkulózy. Okrem toho samozrejme súvisí TB latentne tečúcou intravaskulárnej hemokoagulácie ovplyvňuje priebeh choroby a účinnosti chemoterapie.

U pacientov s pľúcnou TBC prevalencia exsudatívne zápaly zložky dochádza k poklesu krvného antikoagulačnej aktivity. U pacientov s nízkou prevalenciou konkrétne lézií v pľúcach s prevahou produktívny hemokoagulácie intravaskulárnej zápalovú zložkou mierne exprimovaný. U pacientov s pľúcnou tuberkulózy s hemoptysis a pľúcneho krvácania štátneho systému zrážania krvi sa líši: u pacientov s nízkou stratou krvi vo výške gemoptoe alebo bezprostredne po jeho skončení je k prudkému nárastu v krvnej koagulačnej schopnosti v dôsledku závažnej intenzifikácii trombinoobrazovaniya pri zachovaní zvýšenej "konštrukčná" zrážanie krvi. U pacientov s masívnou straty krvi pozorované zníženie zrážanlivosti potenciál na úkor zníženie koncentrácie fibrinogénu. Aktivita faktora XIII, počet krvných doštičiek. Vo fáze chirurgickej liečby u pacientov s obmedzenými formami pľúcnej tuberkulózy s významnými porušeniu dochádza systém homeostázu. Pacienti s rozšíreným spôsobom pri výkone pnevmon- alebo plevropnevmonektomii často vyvinúť DIC, ktorá môže mať podobu "druhého choroby."

Pre sledovanie stavu zrážanie krvi u pacientov s pľúcnou tuberkulóza by malo byť vykonané stanovenie aktivovaného parciálneho tromboplastínového času (aPTT), fibrinogén, trombín, čas, index protrombínového a času krvácania a čas zrážania.

Hormonálny výskum

Nedávne experimentálne a klinické pozorovania ukazujú na prítomnosť hormonálnych zmien stavu v určitom tuberkulózne pneumónie. Je dokázané, že korekcia dysfunkciou hypofýzy, nadobličiek, hypofýzy, štítnej žľazy systémov a pankreatické funkcie v spojení s anti-TB terapia prispievať k aktivácii fibrogeneze a opravy v určitom zápalu lokuse.

Funkčný stav systému hypofýzy a štítnej žľazy sa posudzuje podľa obsahu trijódtyronínu v krvnom sére (T3), tyroxín (T.4), hormónu stimulujúceho štítnu tému hypofýzy (TTG). Bolo zistené, že subklinického hypotyreóza je detekovaná v 38-45% pacientov s pľúcnou tuberkulózy, a najčastejšie je diagnostikovaný s rozšírenou a Fibre-kavernózna formy procesu. Rovnakými formami sú úrovne ako T3,a T4, a existuje nerovnováha týchto hormónov vo forme zvýšenia pomeru T4/ Ts.

Adrenokortikálna funkcia je hodnotená z úrovne kortizolu v krvnom sére, a endokrinné funkcie pankreasu - koncentrácie imuno-reaktívne inzulínu. V akútnej fáze infekcie zvyšuje potrebu endogénneho kortizolu a inzulínu. Hyperinzulinémie je tiež uvedené na telesné tkanivá, rezistencia na inzulín, čo je typické pre každú účinnú zápalovým procesom, najmä špecifický. Stanovenie glyukokortiko idnoy-adrenálnej funkciu s aktívnou tuberkulózou pľúc odhaľuje prítomnosť Cushing u väčšiny pacientov. Normálne hladiny kortizolu koncentrácia v krvi u pacienta s infekčného zápalu, v akútnej fáze je potrebné považovať za relatívna zlyhanie glukokortikoidy funkcie kôry nadobličiek, ktorý môže slúžiť ako základ pre držanie dávky adekvátne substitúcie glukokortikoidov.

Takmer môže byť stanovená jedna tretina pacientov s tuberkulózou pľúc, že ​​úroveň Ince-lin má pomerne nízka a blízko k dolnej hranici normálnych hodnôt, zatiaľ čo 13-20% zaznamenali významný hyperinzulinismus. Relatívny hypo- a hyperinzulinizmus sú vysokými rizikovými faktormi pre vývoj porúch metabolizmu sacharidov v rôznych stupňoch. Tieto zmeny funkčnej aktivity B buniek pankreasu vyžadujú pravidelné monitorovanie glykémie u pacientov s tuberkulózou a včasnú prevenciu diabetes mellitus. Okrem toho. to slúži ako dodatočné zdôvodnenie účelnosti použitia fyziologických dávok inzulínu pri komplexnej terapii tuberkulózy.

Všeobecne platí, že nižšie hladiny hormónov štítnej žľazy a ich nerovnováhy hypercortisolemia a hyperinzulinismus najväčší dosah u pacientov s ťažším priebehom tuberkulóznej proces, s rozsiahlym poškodením pľúc a závažné príznaky tuberkulózy intoxikácie.

Mikrobiologická diagnostika tuberkulózy

Mikrobiologické štúdie sú potrebné na identifikáciu pacientov s tuberkulózou, overenie diagnózy, monitorovanie a korekciu chemoterapia hodnotiacich liečebný výsledok, inými slovami, pretože zápis tuberkulózy pacienta pred vybratím z registra.

Všetky epidemiologické programy a projekty sú založené na hodnotení počtu bakteriálnych exkretorov, ktoré nemožno vykonať bez použitia laboratórnych metód na detekciu tuberkulózy mykobaktérií. V prieskume tzv. Neorganizovanej populácie percento bakteriálnych útočníkov dosahuje 70 alebo viac, čo spôsobuje, že laboratórne metódy sú dostatočne efektívnym prostriedkom identifikácie pacientov s tuberkulózou v tejto populácii.

Tradičné mikrobiologické metódy na diagnostiku tuberkulózy sú bakterioskopické a kultúrne štúdie. Moderné metódy zvažujú kultiváciu mycobacterium tuberculosis v automatizovaných systémoch, nastavenie PCR. Všetky tieto metódy sa však nevyhnutne spájajú s klasickými bakteriologickými metódami.

Zbierka diagnostického materiálu

Účinnosť laboratórnych štúdií závisí vo veľkej miere od kvality diagnostického materiálu. Dodržiavanie pravidiel pre zber, skladovanie a prepravu diagnostického materiálu a presná implementácia algoritmu posudzovania pacienta priamo ovplyvňuje výsledok a zabezpečuje biologickú bezpečnosť.

Pre výskum tuberkulózy sú za použitia rôznych materiálov. Vzhľadom na to, že TB logkih- najbežnejšia forma tuberkulóznymi lézie je základným materiálom pre výskum považovať spúta a iných druhov oddeliteľnou Tracheobronchiálny: sekrécia horných dýchacích ciest, získané po inhalácii aerosólov: bronchiálna premývanie; bronchoalveolárne oplachy; materiál získaný bronchoskopia, a intrapulmonární transtracheální biopsia z bronchiálnych vdychovanie, hrtanu sterov, exsudáty z rany a stery al.

Účinnosť výskumu sa zvyšuje, ak sa vykonáva kontrolovaná zbierka materiálu od pacienta. Na tento účel je pridelená špeciálne vybavená miestnosť alebo zakúpené špeciálne kabíny. Zhromažďovanie materiálu je nebezpečným postupom, preto je potrebné zbierať materiál na výskum, dodržiavať pravidlá infekčnej bezpečnosti.

Materiál na testovanie na mycobacterium tuberculosis sa zhromažďuje v sterilných fľašiach s tesne naskrutkovanými uzávermi, aby sa zabránilo kontaminácii životného prostredia a chránený materiál pred kontamináciou.

Lahvičky na odber diagnostického materiálu musia spĺňať nasledujúce požiadavky:

  • musia byť vyrobené z materiálu odolného voči nárazom;
  • by sa mali ľahko roztaviť počas autoklávovania;
  • dostatočný objem (40 - 50 ml):
  • mať široký otvor na zber spúta (priemer najmenej 30 mm);
  • ľahko manipulovateľné, priehľadné alebo priesvitné, aby ste mohli posúdiť množstvo a kvalitu odobratej vzorky bez otvorenia veka.

Na dosiahnutie optimálnych výsledkov výskumu je potrebné dodržať nasledujúce podmienky:

  • Zozbierajte materiál pred začiatkom chemoterapie;
  • materiál na štúdium sa musí zhromaždiť pred ranným príjmom potravín a liekov;
  • pre výskum je žiaduce zhromaždiť aspoň 3 vzorky ranného hlienu. Zozbierajte spút po dobu troch po sebe idúcich dní;
  • zozbieraný materiál musí byť čo najskôr dodaný do laboratória:
  • v prípade, že je okamžite nemožné dodať materiál do laboratória, je uskladnený v chladničke pri teplote vzduchu 4 ° C najviac 48 hodín;
  • Pri preprave materiálu je potrebné pozorne sledovať integritu liekoviek.

Správne zozbieraný spút je mukózny alebo mukopurulantný. Optimálny objem testovaného spúta je 3-5 ml.

Spúta sa zhromažďuje pod dohľadom lekára. Osoby zodpovedné za zber spúta by mali nasledovať implementáciu určitých pravidiel:

  • Malo by byť vysvetlené účelu pacientov zaradených do štúdie a potrebou vykašľať nie sliny alebo nosohltanu hlien a obsah hlboké dýchacích ciest. To sa dá dosiahnuť v dôsledku produktívneho kašľa, ku ktorému dochádza po niekoľkých (2 - 3) hlbokých nádychoch. Je tiež potrebné upozorniť pacienta na to, že má vypláchnuť ústa vaanou vodou, odstrániť hlavnú časť mikroflóry rastúcu v ústnej dutine a zvyšky potravín, ktoré bránia vyšetreniu sputa;
  • zdravotnícky pracovník, ktorý sa podieľa na zbere spúta, musí okrem županu a klobúka nosiť masku, gumené rukavice a gumovú zástera;
  • stojaci za pacientom sa odporúča, aby fľašu udržal čo najbližšie k jeho perám a hneď sa oddelí do hlienu, pretože kašľa a musí byť zabezpečené, že tok vzduchu je odvádzaný od zdravotníckeho pracovníka:
  • Po dokončení zberu spúta by zdravotnícky pracovník starostlivo uzavrel injekčnú liekovku viečkom a zhodnotil množstvo a kvalitu zozbieraného spúta. Potom je fľaša označená a umiestnená do špeciálnej nádoby na prepravu do laboratória.

alebo aplikovať dráždi inhaláciou pomocou zariadenia, inštalované v miestnosti zbierať - v prípade, že pacient nemá pred skoro ráno v deň odberu materiálu potrebného mu dať vykašliavanie:. výťažok získavaný z koreňov marshmallow (mukaltin), bromhexínu, ambroxol, atď. produkujú hlien, noc spútum. Takto zhromaždený materiál nie je predmetom ochrany a mal by sa skontrolovať v deň zberu. Aby sa zabránilo jeho "utratenie" v laboratóriu v smere by mal mať osobitnú známku.

Ak sa v tomto zariadení nevykonajú mikrobiologické štúdie, zozbieraný diagnostický materiál by mal byť centrálne dodaný do laboratória za predpokladu, že sa materiál zachováva v intervaloch medzi dodávkami v chladničke alebo konzervačnými prostriedkami. Dodajte materiál do laboratória v prepravných boxoch, ktoré sa dajú ľahko dezinfikovať. Každá vzorka by mala byť vybavená príslušným štítkom a celá dávka by mala byť vyplnená sprievodným formulárom.

Spôsoby a frekvencia vyšetrenia pacientov

Pri počiatočnom takzvanom diagnostickom vyšetrení pacienta na tuberkulózu je potrebné preskúmať aspoň 3 časti spúta po dobu 2 alebo 3 dní. zozbierané pod dohľadom zdravotníckeho personálu, čo zvyšuje účinnosť mikroskopu.

Primárne skríningy tuberkulózy by mali vykonávať všetky lekárske diagnostické inštitúcie systému zdravotnej starostlivosti. Nedávno boli na základe klinických diagnostických laboratórií zorganizované tzv. Centrá mikroskopu vybavené modernými mikroskopmi a zariadeniami na epidemiologickú bezpečnosť, aby sa zlepšila účinnosť počiatočného vyšetrenia.

V zariadeniach proti tuberkulóze sa používa skríningový test, ktorý zahŕňa vyšetrenie na spúte alebo iný diagnostický materiál najmenej trikrát počas 3 dní. Počas liečby sa mikrobiologické štúdie vykonávajú pravidelne aspoň raz mesačne počas intenzívnej fázy chemoterapie. Pri prechode do fázy liečby sa štúdie vykonávajú menej často - s intervalom 2-3 mesiacov, zatiaľ čo frekvencia štúdie sa znižuje na dve.

Vlastnosti zbierky diagnostického materiálu pre extrapulmonárnu tuberkulózu

Feature patologický materiál s mimopľúcna formy tuberkulózy - Mycobacterium tuberculosis nízkej koncentrácii v ňom, čo vyžaduje viac citlivé spôsoby mikrobiologických štúdií, a to predovšetkým na sejacie techniky médiu.

Pri tuberkulóze močovej sústavy je moč najdostupnejším študijným materiálom. Zber moču by mal vykonávať špeciálne vyškolená sestra.

Externé genitálie sa premyjú vodou mydlom alebo slabým roztokom manganistanu draselného. Vonkajší otvor močovej rúry je starostlivo ošetrený. V sterilnej liekovke sa zhromažďuje priemerná časť ranného moču: u mužov prirodzene u žien s použitím katétra. Moč z obličkovej panvy sa zhromažďuje v sterilných skúmavkách s katetrizáciou jednej alebo dvoch obličiek, v druhom prípade - nutne oddelene od každej obličky. Malé množstvo tejto moče sa centrifuguje, sediment sa skúma.

U mužov, spermií, bodkovaných semien je tajomstvo prostaty podrobené odstredeniu, aby sa získala zrazenina. Pri akejkoľvek lokalizácii špecifického procesu v genitálnej oblasti u mužov môže masáž prostaty podporiť sekréciu sekrécií obsahujúcich mycobacterium tuberculosis.

Menštruačná krv u žien sa zhromažďuje odsávaním alebo použitím krytu Kafka. Získaný materiál sa zbaví červených krviniek, premyje sa destilovanou vodou a potom sa centrifuguje. Precipitát sa skúma.

Pridelenia z cervikálneho kanálika maternice sa zhromažďujú v niektorých kapacitách Kafka alebo v uzávere, to znamená, že je žiaduce akumulovať 1-2 ml patologického materiálu.

Materiál získaný z operatívnych zákrokov na obličkách, pohlavných orgánoch. s biopsiami, šrotmi z endometria, homogenizovať. K tomu je umiestnený v sterilnej malte a dôkladne rozdrvený sterilnými nožnicami. K tejto suspenzii bol pridaný sterilný riečneho piesku v množstve, ktoré zodpovedá jeho hmotnosti, a potom doplniť s 0,5-1.0 ml izotonického roztoku chloridu sodného a všetko sa rozotrie až pastovitej hmoty s prídavkom izotonického roztoku chloridu sodného (4-5 ml). Potom sa hmotnosť nechá usadiť 1 až 1,5 minúty, supernatant sa skúma.

Tuberkulóza kostí a kĺbov. Punkta (hnis z abscesov) získaná so sterilnou striekačkou sa umiestni do sterilných misiek a ihneď sa do laboratória vloží. Sterilné pipety, navlhčené sterilným fyziologickým roztokom, sa 2-5 ml hnis, je prenesená do vialky guličiek bolo pridané a ďalšie 2-3 ml izotonického roztoku chloridu sodného. Fľaša je uzatvorená korokom a pretrepávaná v žiarovkovom prístroji počas 8 až 10 minút. Homogenizovaná suspenzia sa skúma.

V fistulóznych formách osteoartikulárnej tuberkulózy sa odoberá hnis z fistuly. Veľký výtok sa zhromažďuje priamo do skúmavky. V prípadoch, štíhle pyorrhea fistuly premyje sterilným fyziologickým roztokom, a po premytí boli zhromaždené do skúmavky, alebo kus tampónu impregnovaného hnisom zaslané na analýzu.

Chirurgický materiál, získaný v priebehu chirurgického zákroku na kosti a kĺby sa môžu skladať z hnisavé-nekrotických hmôt, granuláciou, jazvy, kostného tkaniva synoviálnych membránach a iných substrátov. Jeho liečba sa vykonáva tak ako pri tuberkulóze obličiek.

Mikrobiologická štúdia synoviálnej tekutiny v 3% roztoku citrátu sodného (pomer 1: 1) na prevenciu koagulácie sa uskutočňuje ihneď po punkcii.

Tuberkulóza lymfatických uzlín. Odhaľuje sa aj hnis, extrahovaný počas punkcie lymfatických uzlín. ako hnis z abscesov. Tkanivá lymfatických uzlín získané počas chirurgických zákrokov, biopsie, sa skúmajú rovnako ako u iných foriem tuberkulózy.

Štúdia o hmotnosti stolice na mycobacterium tuberculosis je extrémne zriedkavá kvôli takmer úplnému nedostatku pozitívnych výsledkov.

Mikroskopia mykobaktérií

Sputová mikroskopia je pomerne rýchla, jednoduchá a lacná metóda, ktorá sa má použiť vo všetkých prípadoch s podozrením na tuberkulózu. Okrem toho sa táto štúdia uskutočňuje s cieľom vyhodnotiť účinnosť chemoterapie a zistiť, či nie je k dispozícii kultúrny test.

Používajú sa dve metódy mikroskopického vyšetrenia:

  • metóda priamej mikroskopie, keď sa preparát pripravuje priamo z diagnostického materiálu;
  • metóda mikroskopie sedimentu pripraveného z materiálu ošetreného dekontaminantom pre kultúru.

Prvá metóda sa používa v laboratóriách, kde sa vykonávajú len mikroskopické štúdie (klinické a diagnostické laboratóriá všeobecnej zdravotníckej siete).

Najlepšie výsledky mikroskopického vyšetrenia sa získajú koncentráciou diagnostického materiálu (napríklad centrifugáciou).

Na detekciu mykobakteriálnej tuberkulózy s pravdepodobnosťou 50% pri vykonávaní mikroskopie by malo 1 ml spúta obsahovať viac ako 5000 mikrobiálnych buniek. Sputum pacientov s pľúcnymi formami tuberkulózy zvyčajne obsahuje významné množstvo baktérií s kyselinou, ktoré im umožňujú spoľahlivé detekovanie pomocou bakterioskopie. Diagnostická citlivosť tejto metódy sa môže zlepšiť vyšetrením niekoľkých vzoriek spúta od jedného pacienta. Negatívny výsledok bakterioskopického vyšetrenia nevylučuje diagnózu tuberkulózy, pretože niektoré pacientky majú v spúte menej mykobaktérií, ako je možné zistiť pomocou mikroskopie. Nesprávna príprava rozteru spúta môže tiež spôsobiť negatívny výsledok bakterioskopického vyšetrenia.

Najčastejšou metódou na detekciu kyslých rýchlych mykobaktérií v nátere je farba podľa Tsiol-Nelsena. Spôsob je založený na penetrácii karbolického fuchsinu do mikrobiálnej bunky cez membránu, ktorá obsahuje vrstvu voskovitých lipidov za súčasného zahrievania a silného leptania fenolu. Následné sfarbenie náteru s 25% roztokom kyseliny sírovej alebo 3% kyseliny chlorovodíkovej vedie k odfarbeniu všetkých nekyslo-rýchlych štruktúr. Zafarbené prvky náteru sú farbené 0,3% roztokom metylénovej modrej. Mykobaktérie neberú obyčajné anilínové farby, čo má za následok acidorezistentné bacily sú sfarbené karmínovo červenú farbu, a iné choroboplodné zárodky a bunkové elementy - modro.

Pre náteroch zafarbených Ziehl-Nelsen pomocou svetelného binokulárneho mikroskopu s olejovým objektívom (90- alebo 100-násobné zvýšenie) a okulárom na zväčšenie 7- alebo 10-násobné. Preskúmajte 100 zorných polí, čo stačí na identifikáciu jednotlivých mykobaktérií v škvrnám. V tomto prípade, ak je výsledkom tejto štúdie je negatívny, potvrdiť odporúčaných zobraziť viac 200 zorné pole. Zaznamenajte výsledky a uveďte počet zistených kyslých rýchlych bacilov (KUM).

Okrem tejto techniky sa na luminiscenčnú mikroskopiu používajú aj farebné farbodlámy, ktoré umožňujú dosiahnuť najlepšie výsledky. Použitie tejto metódy zvyšuje účinnosť mikroskopie o 10-15%. Pri liečbe mykobaktérií luminiscenčnými farbivami (auramín, rodamín atď.) Sa tieto látky tiež viažu na voskovité štruktúry mikrobiálnej bunky. Pri ožarovaní farebných buniek s vzrušujúcim svetelným zdrojom (určité spektrum ultrafialového žiarenia) začínajú svietiť oranžovým alebo jasne červeným svetlom na čiernom alebo tmavozelenom pozadí. Vďaka vysokému jasu a kontrastu viditeľného obrazu môže byť celkové zväčšenie mikroskopu znížené 4 až 10 krát, zorné pole sa rozširuje a doba zobrazenia prípravku klesá. Spolu s tým, vzhľadom na oveľa väčšiu hĺbku poľa, môžete zvýšiť pohodlie štúdie.

Keď sa fluorescenčná mikroskopia použije na skenovanie tej istej oblasti, roztieranie vynakladá výrazne menej času ako svetelná mikroskopia farbenia Tsiol-Nelsen. Ak za jeden pracovný deň mikroskop skúma asi 20 až 25 takýchto škvŕn, potom pomocou fluorescenčnej mikroskopie môže skúmať viac ako 60-80 vzoriek súčasne. Skúsení mikroskopisti vedia, že sfarbenie buniek so zmesou auramínu a rodamínu je nejakým spôsobom špecifické pre kyselinovzdorné bacily, ktoré v tomto prípade vyzerajú ako zlaté tyčinky. Saprofyty sú maľované nazelenalou farbou.

Ďalšou dôležitou výhodou spôsobu fluorescenčné mikroskopia - schopnosť detekovať zmenené Mycobacterium, stratil pod vplyvom nepriaznivých faktorov, vrátane intenzívny chemoterapia, kislotousotoychivosti majetku a v súvislosti s týmto farbením Ziehl-Nelsen nie je detekovaný.

Nevýhody metódy fluorescenčnej mikroskopie zahŕňajú relatívne vysoké náklady na mikroskop a jeho prevádzku. Avšak v centralizovaných alebo iných veľkých laboratóriách, kde záťaž presahuje normu 3 laboratórnych technikov pracujúcich s tromi bežnými mikroskopmi, je lacnejšie použiť namiesto toho jeden fluorescenčný mikroskop.

Bakterioskopické metódy majú skôr vysokú špecifickosť (89-100%). Približne 97% pozitívnych výsledkov získaných akoukoľvek mikroskopickou metódou jednoznačne potvrdzuje výsledky siatia.

Je potrebné poznamenať, že v mikroskopickom skúmaní náteroch patologického materiálu nemôže identifikovať druhy acidorezistentné bacily detekovaný. Spôsob mikroskopia umožňuje, aby sa vyjadril iba na prítomnosti alebo neprítomnosti kyseliny v príprave mikroorganizmov, čo sa dá vysvetliť existenciou v prírode z veľkého počtu morfologicky podobné tuberkulózou mykobaktérií komplexné mikroorganizmov rezistentných kyselín nontubercular.

Výsledky mikroskopie sa vyhodnocujú v semikvantitatívnych jednotkách.

Aby bolo možné porovnať výsledky rôznych metód mikroskopia, empirické koeficienty sú podávané. Napríklad, porovnať výsledky náteroch zafarbených s fluorescenčnými farbivami, dáta výskum svetelný mikroskop (1000 násobné zväčšenie), je nutné rozdeliť počet acidorezistentné bacily detekovaná fluorescenčným mikroskopom, zodpovedajúce koeficient pri 250-násobnom zväčšení, - až 10, 450-krát - na 4, 630-krát - na 2.

Vlastnosti mikroskopie pre extrapulmonárnu tuberkulózu

Vykoná sa priama mikroskopia, ako aj mikroskopia škvŕn pripravených po obohatení, po ktorých nasleduje farbenie Tsiol-Nelsen alebo luminiscenčné farbivá. Priama mikroskopia škvŕn je neúčinná kvôli nízkej koncentrácii mykobaktérií v materiáli, a preto je racionálnejšie používať metódy obohacovania. Najefektívnejšie je odstreďovanie. V prípade, že biologický materiál je viskózny, centrifugácia sa nanáša súčasným skvapalňovanie a homogenizácia materiálu, ktorý sa vykonáva za použitia vysokorýchlostných odstrediviek s odstredivou silou 3000 g a roztoky chlórnanu. Iné spôsoby obohacovania, ako napríklad mikro flotácia, sa v súčasnosti nepoužívajú z dôvodu tvorby biologicky nebezpečných aerosólov.

Kultúrna metóda diagnostiky tuberkulózy

Spôsob výsevu alebo metóda kultivácie je citlivejšia ako mikroskopia na rozmazanie a má niekoľko výhod oproti zmrzlinovej mikroskopii. Umožňuje zistiť niekoľko desiatok životaschopných mykobaktérií v testovacom materiáli a má veľkú diagnostickú hodnotu. To je obzvlášť dôležité pri skúmaní materiálu od novodiagnostikovaných alebo liečených pacientov, ktorí uvoľňujú malé množstvo mykobaktérií.

V porovnaní s mikroskopom, kultúra môže zvýšiť počet odhalených prípadov tuberkulózy o viac ako 15-25%, rovnako ako overenie tuberkulózy v skorších fázach, kedy sa choroba je stále dobre reaguje na liečbu. Veľmi dôležitou výhodou kultivačného testu je možnosť získať kultúru excitátora, ktorá môže byť identifikovaná a študovaná s ohľadom na citlivosť na liek, virulenciu a iné biologické vlastnosti.

Nevýhody spôsobov kultivácie zahŕňajú ich trvanie (čakacia doba materiálov dosahuje 10 týždňov). vyššie náklady, zložitosť spracovania diagnostického materiálu.

Princípy predbežnej liečby diagnostického materiálu

Bežné mikrobiologické metódy sa nemôžu použiť pri uskutočňovaní štúdií o tuberkulóze. Je to kvôli tomu. že mycobacterium tuberculosis rastie veľmi pomaly a väčšina klinických vzoriek obsahuje rýchlo rastúce pyogénne a hnilobné mikroorganizmy, huby. Ich rýchly rast na bohatých živných médiách zasahuje do vývoja mykobaktérií a neumožňuje izoláciu pôvodcu tuberkulózy, takže diagnostický materiál musí byť pred zaočkovaním predbežne ošetrený. Navyše, mykobaktérie uvoľnené z dýchacích ciest pacienta sú zvyčajne obklopené veľkým množstvom hlienu, čo sťažuje ich koncentráciu. V tomto ohľade, pred výsadbou spúta a iných podobných materiálov, ich skvapalňovanie, dekontaminácia je nevyhnutná.

Všetky detergenty a dekontaminačné majú viac či menej závažné toxické účinky na mykobaktérií. V dôsledku spracovania môže umierať až 90% mykobaktérií. Pre udržanie dostatočného množstva mykobakteriálne populácie, šetriace potrebu použitia techník spracovania, ktoré umožňujú, na jednej strane, k potlačeniu rýchlo rastúce pyogénne baktérie a skazený, a na druhej strane - aby sa zachovala životaschopnosť mykobaktérií prítomných v materiáli.

V závislosti od materiálu, jeho stupeň homogenity a znečistenia pre predspracovanie pomocou rôznych dekontaminačné: spútum - 4% roztoku hydroxidu sodného, ​​roztoky trohzameschonnogo fosforečnan sodný 10%, benzalkóniumchlorid, fosforečnan sodný, Nalco-NaOH (N-acetyl-L-cysteínu hydroxidu sodného) v konečnej koncentrácii 1% roztoku hydroxidu sodného, ​​v moči a iných kvapalných látok - roztoku kyseliny sírovej 3%, pre kontaminované vzorky, materiály obsahujúce tuk - roztok kyseliny šťavelovej, pričom sa 5%. Okrem toho sa v niektorých prípadoch používajú enzýmy, povrchovo aktívne látky (detergenty). Aplikačné Tween detergenty a iné mykobakteriálna smrť sprevádza menej bunkách (40-50% prežiť). Môžu sa však použiť iba na kvapalné materiály. Najväčšou distribúciou na svete bola NALC-NaOH. vyrobené v súpravách. Táto metóda umožňuje vyčleniť viac ako 85% populácie mykobakteriálnych buniek. Dekontaminačné tkanesoderzhaschih pevné látky ťažšie odhadnúť, pretože stupeň disperzie materiálu počas homogenizácie ťažké. Napríklad biopsia liečba lymfatických uzlín je často sprevádzaná zvýšenou frekvenciou kontaminácie cudzími flóry. V tomto prípade sa môže použiť 1% etonia.

Nehomogénny materiál sa homogenizuje so sklenenými guľôčkami v prítomnosti dekontaminujúcich látok. Kvapalné materiály sa predcentrifugujú a spracuje sa len zrazenina.

Techniky výsevu a inkubácie

Po predbežnom spracovaní sa materiál centrifuguje, čím sa zrážajú mykobaktérie a zvyšuje ich obsah v sedimente ("obohatenie kalu"). Výsledná zrazenina sa neutralizuje a inokuluje (zaočkuje sa) hustým živným médiom alebo skúmavkami s kvapalným (semikvapalným) médiom. Zo zvyšku sedimentu sa pripravia škvrny na mikroskopické vyšetrenie. Technológia očkovania by mala zabrániť krížovej kontaminácii diagnostického materiálu.

Pre spoľahlivú klinickú interpretáciu výsledkov mikrobiologickej štúdie sa musí dodržať nasledovné pravidlo: mikroskopické štúdie a štúdie o kultúre sa musia vykonať paralelne z tej istej vzorky diagnostického materiálu.

Inokulované trubice sa umiestnia do termostatu pri teplote 37 ° C počas 2 dní v horizontálnej polohe. Tým sa zabezpečí rovnomernejšia absorpcia materiálu do kultivačného média. Po 2 dňoch sa skúmavky prenesú do zvislej polohy a hermeticky utesnia gumovými alebo silikónovými zátkami, aby sa zabránilo vysychaniu zasiateho média.

Plodiny sa uchovávajú v termostate pri teplote 37 ° C počas 10-12 týždňov s pravidelným týždenným sledovaním. Pre každý náhľad sú zaznamenané nasledujúce parametre:

  • obdobie vizuálne pozorované odo dňa výsevu;
  • miera rastu (počet CFU);
  • kontamináciu plodiny vonkajšou mikrobiálnou flórou alebo hubami (takéto rúrky sa odstránia);
  • nedostatok viditeľného rastu. Rúrky zostanú v termostate, až kým sa neskončí ďalší pohľad.

Živné médiá

Na kultiváciu mykobaktérií sa používajú rôzne živné médiá; hustá, polotekutá, tekutá. Avšak žiadne známe živné médium nemá vlastnosti, ktoré zabezpečujú rast všetkých mykobakteriálnych buniek. V súvislosti s tým sa odporúča používať 2-3 živné médiá rôzneho zloženia na zvýšenie účinnosti súčasne.

WHO odporúča prostredie Levenstein-Jensen ako štandardné médium na primárnu izoláciu pôvodcu tuberkulózy a na určenie jej citlivosti na liek. Toto je husté vaječné prostredie, na ktorom sa rast mykobaktérií dosiahne 20. až 25. deň po naočkovaní bakterioskopicky pozitívneho materiálu. Plodiny bakterioskopicky negatívneho materiálu vyžadujú dlhšiu inkubačnú dobu (do 10-12 týždňov).

V našej krajine navrhovaná E.R. Finské vaječné prostredie Finn-II. To sa líši tým, že namiesto L-asparagínu používa glutamát sodný, ktorý spúšťa iné spôsoby syntézy aminokyselín mykobaktérií. Rast sa objavuje na tomto médiu o niečo skôr a frekvencia prideľovania mykobaktérií je o 6-8% vyššia ako v médiu Lowenstein-Jensen.

Pre zlepšenie účinnosti bakteriologické diagnostiky mimopľúcna tuberkulózy je vhodné zaradiť do zložitých živnom médiu modifikovanom médiu Finn-II. Na urýchlenie rastu v živnom prostredí, Finn-II je ďalej podávaný sodík tioglykolát 0,05%, zníženie koncentrácie kyslíka. Pre ochranu enzýmu z Mycobacterium systémov toxických produktov peroxidácie lipidov v živnom médiu Finn-II podávať antioxidačné α-tokoferol acetátu v koncentrácii 0,001 ug / ml. Zaočkovanie diagnostického materiálu sa uskutočňuje štandardným postupom.

V ruských laboratóriách proti tuberkulóze sa používajú iné modifikácie hustých živín; navrhol G.G. Mordovské živné médium "nové", vyvinuté V.A. Anické živné média A-6 a A-9 atď.

Vzhľadom k tomu, že v procese chemoterapie je poškodenie na rôzne metabolické systémy mikrobiálnych buniek, niektoré mykobakteriálne populácie stráca schopnosť vyvinúť normálne v bežnom živnom médiu a vyžaduje osmoticky vyvážené (alebo polotekutej) kultivačného média.

Posúdenie a zaznamenávanie výsledkov očkovania diagnostického materiálu

Niektoré kmene a druhy mykobaktérií rastú pomaly, rast sa môže objaviť až do 90. dňa. Počet takýchto plodín je malý, ale umožňuje to odolávať plodinám v termostate na 2,5-3 mesiacov.

Virulentné kultúry mycobacterium tuberculosis obvykle rastú v prostredí s hustým vajíčkom vo forme R-kolónií rôznych veľkostí a druhov. Kolónie suché, vrásčité, slonovinovo, mierne pigmentované. V iných médiách môže byť kolónia mycobacterium tuberculosis vlhšia. Po ukončení chemoterapie alebo počas liečby sa môžu priradiť hladké kolónie s vlhkým rastom (S-formy).

Pri izolácii plodín sa používa súbor špeciálnych štúdií na rozlíšenie mycobacterium tuberculosis od netuberkulóznych mykobaktérií a kyselinovzdorných saprofytov.

Pozitívna odpoveď je poskytnutá po povinnom mikroskopickom vyšetrení zafarbených odtieňov Tsiol-Nelsen z pestovaných kolónií. V prípade rastu mykobaktérií v nátere detekovať jasne červenej tyčinky ležiace jednotlivo alebo v skupinách, tvoriť zhluky vo forme plsti alebo opletenie. U mladých kultúrach, najmä izolovaných z dlhodobej liečby pacientov s chemoterapiou, mykobaktérie líšia exprimovaný polymorfizmus, až prítomnosti tyče v tvare, spolu s krátkymi, takmer kokovitý alebo predĺžených verzií, ktoré sa podobajú mycélium.

Rýchlosť rastu mykobaktérií je indikovaná nasledujúcou schémou: (+) - 1-20 cfu in vitro (málo vylučované baktérie); (++) - 20-100 CFU in vitro (mierne vylučovanie baktériami); (+++) -> 100 CFU in vitro (bohaté vylučovanie baktériami). Pri laboratórnej diagnostike tuberkulózy nestačí odpovedať, či je mykobaktérium detegované jednou alebo inou metódou. mať podrobné pochopenie rozsahu a charakteru mykobakteriálnej populácie, jej zloženia a vlastností. Práve tieto údaje nám umožňujú správne interpretovať stav procesu, plánovať taktiku a včas upravovať liečbu.

V posledných rokoch bolo navrhnuté urýchliť rast mykobaktérií, navrhli sa živné médiá na báze agaru s rôznymi rastovými prísadami a použitie špeciálnej zmesi plynov. Na získanie rastu mykobaktérií na týchto médiách počas kultivácie vzniká atmosféra s vysokým obsahom oxidu uhličitého (4-7%). Na tento účel sa špeciálne CO2-inkubátory. Avšak najrozvinutejšie automatizované systémy na kultiváciu mykobaktérií: MGIT-BACTEC-960 a MB / Bact.

Jeden takýto systém - MGIT systém (rast mykobaktérií označujúce trúbka), ktorý sa odvoláva na vývoj špičkových technológií a je určený pre rýchlu bakteriologickú diagnostiku tuberkulózy a Mycobacterium náchylnosti k prvej línie liekov, a niektoré lieky druhého radu. MGIT je zameraný na použitie ako súčasť zariadenia VASTES-960. Mikroorganizmy sa kultivujú v špeciálnych skúmavkách s kvapalným živným médiom založeným na modifikovanom médiu Middlebrook-7H9. Pre stimuláciu rastu mykobaktérií a kontrolu rastu doplnky cudzej mikroflóry používaný rastu MGIT Growth Supplement a zmes antimikrobiálnych látok panta.

Rast mikroorganizmov sa zaznamenáva opticky. Je založená na fluorescencii, ku ktorej dochádza pri spotrebovaní kyslíka mykobaktériami počas rastu. Fluorescenčné farbivo závislé od kyslíka sa nachádza na dne špeciálnej skúmavky a je pokryté vrstvou silikónu. Reprodukcia mykobaktérie vedie k zníženiu množstva kyslíka v trubici a zníženie koncentrácie, ktorá spôsobuje zvýšenie fluorescencie, ktorá sa stáva viditeľný za ožarovanie ultrafialovým svetlom rúrky a automaticky registrovaný fotosenzor vstavaný spotrebič VASTES-960. Intenzita luminiscencie sa zaznamenáva v jednotkách rastu (jednotky GU-rastu). Údaje o raste sa zaznamenávajú v počítači, kde sa dajú automaticky uložiť. Počítačová analýza rastových kriviek môže poskytnúť informácie o prítomnosti rôznych Mycobacterium bazénov, vrátane nontubercular, a tiež pomáha vyhodnotiť vlastnosti rastu mykobaktérií.

V dôsledku doby výskytu takýchto systémov mykobakteriálne rast sa výrazne znižuje, v priemere 11 dní VASTES-960 a 19 dni na MB / Bacto na 33 dní na štandardnom pevnom živnom médiu. Treba poznamenať, že tieto systémy vyžadujú vysoko kvalifikovaný personál. Očkovacie materiál pre kvapalné médiá bude vyvedený sejbou na Lowenstein-Jensen médiá, hrajú úlohu záskok v prípadoch, keď iné nosiče Mycobacterium tuberculosis nedovoľujú rásť.

Stanovenie citlivosti mykobaktérií na liečivo

Stanovenie rozsahu a stupeň citlivosti mykobaktérií k anti-TB drogy má dôležité klinické dôsledky, ako aj epidemiologickú Vyhodnotenie rezistentné tuberkulózy. Okrem toho monitorovanie rezistencie voči liekom umožňuje posúdiť účinnosť programu tuberkulózy ako celku a je neoddeliteľným ukazovateľom účinnosti všetkých zložiek činností proti tuberkulóze.

Viacnásobnosť a načasovanie citlivosti na liek:

  • pred začiatkom liečby raz na určenie stratégie a taktiky liečby:
  • keď sú izolované z chorých kultúr z rôznych materiálov (spút, tekutina BAL, moč, výpotky, tekutina atď.), všetky izolované kmene sa skúmajú:
  • na konci intenzívnej fázy liečby bez klinickej a rádiologickej dynamiky:
  • ak je potrebné zmeniť režim liečby v nasledujúcich prípadoch:
    • neprítomnosť nánosu spúta;
    • reizolácia kultúry po negatívnom štiepení na spúte;
    • drastické zvýšenie počtu CMB v tampóne po prvom poklese. Je dobre známe, že kmene mycobacterium tuberculosis, ktoré sú heterogénne z hľadiska citlivosti na liek, sú izolované z materiálu od pacienta s tuberkulózou. Citlivosť kmeňov na lieky proti tuberkulóze sa môže líšiť v rozmedzí liekov, stupňa, frekvencie a miery výskytu rezistencie.

Stupeň liekovej rezistencie Mycobacterium tuberculosis bola stanovená v súlade so stanovenými kritériami, ktoré sú zamerané na klinický význam a stabilita závisí od aktivity anti-TB lieku, jeho farmakokinetiku, koncentrácia v léziu. maximálna terapeutická dávka atď.

Stanovenie citlivosti mykobaktérií na liečivo sa v súčasnosti vykonáva mikrobiologickými metódami:

  • Absolútne koncentrácie (metóda riedenia na hustom alebo kvapalnom živnom médiu),
  • proporcie,
  • koeficient odporu.

Obvykle stabilita prejavuje vizuálne pozorovateľný rast kolónií Mycobacterium tuberculosis, ale existujú techniky, ktoré indukujú skorá štádia rastu v deliacich sa bunkách Mycobacterium vo forme farebnej reakcie. Tieto metódy skracujú čas od 3 do 4 týždňov.

Ako je zjednotená v Rusku bola predĺžená, odporúča chemoterapia metódou WHO výboru absolútnych koncentrácií, čo je z metodického hľadiska, je najjednoduchšie, ale vyžaduje vysokú presnosť a štandardizácie laboratórnych postupov. Test na citlivosť na liek pozostáva zo súboru skúmaviek so živným médiom modifikovaným anti-TB liekmi. Súprava sa skladá z 2-3 rúrok s rôznymi koncentráciami každého z liečiv používa, jedna riadiace rúrky bez lieku na životné prostredie a jedna skúmavka obsahujúca 1000 mcg / ml sodného Sali tsilovokislogo alebo 500 ug / ml paranitrobenzoynoy kyselina nontubercular pre detekciu rastu mykobaktérií.

Na prípravu sady médií s prípravkami sa použije modifikované médium Levenstein-Jensen (bez škrobu), ktoré sa naleje do baniek. V každej banke sa pridá špecifický objem vhodného zriedenia antituberkulózneho prípravku. Obsah banky sa dôkladne premieša, vleje sa do skúmaviek a skladá sa v naklonenej polohe počas 40 minút pri teplote 85 ° C. Odporúča sa, aby sa médium stočilo v elektrickom revízore s automatickou reguláciou teploty. V stredu s drogami proti TBC

1. séria sa môže skladovať v chladničke pri 2-4 ° C počas 1 mesiaca, pričom prípravky druhého radu - nie viac ako 2 týždne. Skladovanie médií s prípravkami pri izbovej teplote je neprijateľné. Pri príprave roztokov liekov proti tuberkulóze sa berie do úvahy ich aktivita, výpočet koncentrácie upravenej na základe molekulovej hmotnosti nešpecifickej časti prípravku, čistoty atď. Na stanovenie citlivosti na liek sa používajú iba chemicky čisté látky.

Princípom metódy je určenie koncentrácie antituberkulózneho liečiva, ktoré inhibuje rast významnej časti mykobakteriálnej populácie. Ak sa to urobí správne, má táto metóda dobrú spoľahlivosť.

Pred testom je potrebné dbať na to, aby izolovaná kultúra mycobacterium tuberculosis neobsahovala ďalšiu mikroflóru. Z kultúry mykobaktérií v 0,9% roztoku chloridu sodného pripravená homogénna suspenzia obsahujúca 500 miliónov mikrobiálnej telies v 1 ml (optický zákal štandardná 5 jednotiek). Výsledná suspenzia sa zriedi 0,9% roztokom chloridu sodného (1:10) a pipety 0,2 ml suspenzie v každej sade trubice kultivačného média. Očkované Skúmavky boli umiestnené do inkubátora pri teplote 37 ° C a udržiava sa vo vodorovnej polohe po dobu 2-3 dní na šikmej ploche médiá boli rovnomerne naočkujú suspenziou Mycobacterium tuberculosis. Skúmavky sa potom prenesú do vertikálnej polohy a inkubujú sa 3-4 týždne. Výsledky sa zaznamenávajú po 3-4 týždňoch.

Vzhľadom k tomu, načasovanie uvoľňovanie látky z klinického materiálu na živnom médiu tvorí najmenej 1-1,5 mesiaca liekovej citlivosti môžu byť získané týmto spôsobom, je nie skôr ako po 2-2,5 mesiaca po očkovacieho materiálu. Toto je jedna z hlavných nevýhod tejto metódy.

Interpretujte výsledky stanovenia citlivosti mykobaktérií na lieky na základe určitých kritérií. Na pevnom kultivačnom médiu sa za citlivé na koncentráciu lieku, ktorý je obsiahnutý v médiu, v prípade, že počet kolónií mykobaktérií pestovaných in vitro s týmto liečivom nečiní viac než 20 s bohatým rastom v kontrolnej skúmavky bez liečiva. Iba v prítomnosti viac ako 20 kolónií je kultúra považovaná za odolnú voči tejto koncentrácii. V praxi pri získaní výsledkov rastu v skúmavkách blízke 20 cfu. je potrebné oznámiť Clinical Unit, citlivosť alebo odpor v tomto prípade je povaha hraníc, ako to môže niekedy vysvetliť fuzzy dynamiku klinických ukazovateľov.

Pri rôznych liečivách sa stanovuje určitá koncentrácia, pri ktorej sa pozoruje reprodukcia kritického podielu mykobakteriálnej populácie. Tieto koncentrácie sa nazývajú "kritické". Ako kritérium stability sa používa rast populácie mykobaktérií na živnom médiu s prípravkom v kritickej koncentrácii.

V domácej praxi TB pri určovaní rezistencie na liek nie sú obmedzené len na stanovenie kritických koncentrácií. Je to kvôli tomu. že rozšírená úroveň definície liekovej rezistencie umožňuje lekár presnejšie polohy taktiku chemoterapie s použitím znalosti potenciácia účinku liekových kombinácií, krížom krážom očakávaný odpor alebo použiť účinnejšie lieky skupina použitá anti-TB liečivami.

Metóda absolútnej koncentrácie je najjednoduchšia, ale je aj najcitlivejšia na chyby, ktoré sa robia pri jej vykonávaní. Spoľahlivejšie, najmä pri určovaní citlivosti na lieky druhej línie a spoločné mimo Ruska je metóda proporcií. Zohľadňuje nedostatky metódy absolútnych koncentrácií, ale pri vykonávaní je viac namáhavé.

Metóda je veľmi podobná metóde absolútnej koncentrácie. Príprava skúmaviek s liekmi sa vykonáva rovnakým spôsobom. ako v metóde absolútnej koncentrácie. Avšak dávka semien suspenzie mykobaktériovej tuberkulózy sa zníži o faktor 10. ktorý eliminuje frekvenciu spontánnej rezistencie niektorých kmeňov mycobacterium tuberculosis na také liečivá ako Etambutol, protionamid, kapreomycín. Ako kontrola sa použili 2 alebo 3 skúmavky s rovnakou dávkou osiva v skúmavkách, postupne zriedené 10 a 100 krát. Kritériom stability je podiel vizuálne pozorovaného rastu mycobacterium tuberculosis. Pre liečivá 1. kritérium stability vedenie je prekročenie rastu 1% počiatočnej populácii pre formulácie 2. série - nárast o 1 alebo viac ako 10% pôvodnej veľkosti, v závislosti na zvolenej kritickej koncentrácie.

V roku 1997 pracovná skupina Svetovej zdravotníckej organizácie a Medzinárodnej únie pre identifikáciu dobré tuberkulózy odporu TB drogy urobil úpravy týchto kritérií, ktoré ponúkajú za rezistentné mykobaktérie, ktoré nerastú na pevný vaječný médiá Lowenstein-Jensen v nasledujúcich koncentráciách:

  • dihydrostreptomycín - 4 μg / ml;
  • izoniazid 0,2 μg / ml:
  • rifampicín 40 μg / ml:
  • Etambutol je 2 μg / ml.

V roku 2001 boli navrhnuté kritické koncentrácie pre nasledujúce lieky druhej línie (pre kritický podiel 1%):

  • capreomycín - 40 μg / ml;
  • protionamid - 40 mcg / ml;
  • kanamycín - 30 μg / ml;
  • viomycín - 30 μg / ml;
  • cykloserín 40 μg / ml;
  • kyselina aminosalicylová - 0,5 μg / ml;
  • ofloxacínu - 2 μg / ml.

Výsledky rastu sa hodnotia po 4 týždňoch ako predbežná a po 6 týždňoch kultivácie - ako posledná.

Na stanovenie citlivosti na liek na pyrazínamid, ktorý sa v súčasnej chemoterapii používa pri tuberkulóze, odporúčaná kritická koncentrácia je 200 μg / ml. Neexistuje však žiadna všeobecne akceptovaná metóda na stanovenie rezistencie voči tomuto lieku na tuhé živné médium, pretože jeho antibakteriálna aktivita sa prejavuje iba v kyslom prostredí (pH oC;

  • absencia pigmentácie (slonoviny);
  • značne kyslý-rýchla farba;
  • pozitívny niacínový test;
  • pozitívny test nitrátovej reduktázy;
  • absencia termostabilnej katalázy (68 ° C).
  • Absencia rastu na médiu Levenstein-Jensen obsahujúca:
    • 1000 μg / ml salicylátu sodného,
    • 500 μg / ml kyseliny paranitrobenzoovej,
    • 5% chloridu sodného:
  • rast v prítomnosti 1-5 ug / ml tiofén-2-karboxylovej kyseliny.
  • Význam diferenciácie izolovaných mykobaktérií sa výrazne zvýši so zvýšením frekvencie zaznamenávania prípadov HIV / AIDS súvisiacich s tuberkulózou alebo mykobakteriózou. V súčasnosti neexistuje absolútna istota pripravenosti praktických regionálnych laboratórií správne vykonávať tento objem práce.

    Imunologická diagnostika tuberkulózy

    Existuje celý rad univerzálnych javov, drog a imunologické testy, ktoré boli pôvodne objavené v tuberkulózy alebo modelov imunitnej odpovede na mykobaktérií. Patrí medzi BCG tuberkulínu, taký jav ako kožné DTH (tuberkulínu - Pirquet a Mantoux reakcie), v reakcii na podkožnej tuberkulínových senzibilizovaných zvierat (Koch jav). Jedna z prvých protilátok pri infekčných ochoreniach bola tiež zistená pri tuberkulóze. Samozrejme, že hlbšie porozumenie dobré mechanizmy tuberkulózy imunitných a ich genetickej kontroly, tým väčšia môže byť použitie imunologických metód a liekov, ktoré majú vplyv na imunitný systém, riešiť praktické problémy TB.

    Najdôležitejším a najťažším praktickým problémom sa v súčasnosti považuje detekcia tuberkulózy v procese masového skríningu populácie. Avšak napriek početným hláseniam o "úspechoch" (na obmedzený materiál) neexistuje žiadna vhodná imunologická metóda (reprodukovateľná v "akejkoľvek zbrane") a liekom vhodným na tento účel.

    Imunologické metódy, najmä sérologické štúdie (stanovenie antigénov, protilátok) a tuberkulín vyvolávajúce testy sa v klinickej praxi veľmi používajú.

    V prvom rade medzi imunologickými štúdiami používanými v diferenciálnej diagnostike existujú sérologické metódy - stanovenie antigénov a protilátok v rôznych prostrediach tela.

    Špecifickosť protilátok proti tuberkulóze mykobaktérií závisí od antigénov použitých v imunoteste. Predpokladá sa významné množstvo antigénov, z ktorých prvý je tuberkulínový PPD:

    • PAP a iných komplexných prípravkov z kultúrnej kvapaliny;
    • ultrazvuková dezintegrácia;
    • Extrakt z tritónu a ostatné komplexné prípravky bunkových stien;
    • 5-antigén (Daniel);
    • 60-antigén (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • koordinačný faktor (trehalóza-6,6-di-mykolát);
    • fenolické a iné glykolipidy;
    • lipopolysacharid;
    • antigén viažuci fibronektín;
    • proteíny (najčastejšie rekombinantné); 81,65,38,34,30,19,18,16,15,12 CDA atď.

    V dôsledku rokov výskumu ruských a zahraničných vedcov odhalili základné zákony a účinnosť protilátky sérologickú diagnostiku tuberkulózy: zložitejšie antigénu je vyššia citlivosť a nižšiu špecificitu testu. Špecifickosť v rôznych krajinách, sa líši v závislosti od počtu obyvateľov infekcie M. tuberculosis a nontubercular mykobaktérií z nesúci BCG vakcinácii a ďalšie. U detí, informačný obsah serodiagnosis je nižšia ako u dospelých. Pri primárnej tuberkulóze (častejšie u detí) je definícia IgM viac informatívna. so sekundárnym IgG. U HIV-infikovaných pacientov je informatívna hodnota sérologickej diagnózy pri určovaní protilátok znížená. Stanovenie účinnosti protilátok je závislá na počte "klinických aspektov": Proces aktivita (prítomnosť alebo neprítomnosť "izolácia" mykobaktérií prítomnosť rozpadu dutín, je stupeň infiltrácia), prevalencia procesu, trvanie jeho toku.

    Citlivosť metódy enzýmovej imunoanalýzy (ELISA) je približne 70%. Nedostatočná účinnosť štúdie je spôsobená nízkou špecifickosťou. Predtým sa zvážila možnosť použitia sérologického skríningu vo vysokorizikových skupinách, najmä u osôb s post-tuberkulóznymi zmenami v pľúcach.

    Pre zvýšenie špecificity ELISA pokračovať v hľadaní viac špecifické antigény, vrátane tých, vyrobený pomocou génového inžinierstva: (. Pozri vyššie), ESAT-6, a ďalšie.. Použitie striktne špecifických antigénov (38 kDa, ESAT) zvyšuje špecifickosť. ale výrazne znižuje citlivosť analýzy. Spolu s IFA (skúšobných systémov experimentálne laboratóriá. Napr Pathozyme ELISA kit) tiež poskytuje sady s bočným imunochromatografickým filtráciou (Mycodot), rovnako ako iné podobné testy (dot-analýza na membráne) s vizuálnym posúdenie výsledku testu. Počas týchto testov sa analýza uskutočňuje 10 až 30 minút; nevyžadujú špeciálne vybavenie, vyžadujú vizuálne vyhodnotenie výsledkov, ktoré súvisia s určitou subjektivitou. Tieto metódy majú približne rovnakú citlivosť a špecifickosť charakteristiky (70% a 90 až 93%, v tomto poradí) ako tradičné ELISA.

    Použitie metód imunitnej analýzy má určitú hodnotu ako ďalšiu, zohľadnenú v komplexe použitých metód, v diferenciálnej diagnostike tuberkulózy, najmä v diagnostike jej extrapulmonárnych foriem. Najefektívnejšia metóda ELISA je v diagnostike tuberkulóznej meningitídy v štúdii mozgovomiechovej tekutiny. V tomto prípade je citlivosť analýzy 80-85% a špecifickosť je 97-98%. Existujú údaje o účinnosti detekcie protilátok proti tuberkulóze mykobaktérií v slznej tekutine pri diagnostike tuberkulóznej uveitídy.

    Indukcia syntézy gama interferónu in vitro

    Interferón gama (IFN-γ) je špecifický imunitný obranný faktor realizovaný aktiváciou enzýmových systémov makrofágov. Indukcia syntézy IFN-y senzibilizovanými T-lymfocytmi spôsobuje ich interakciu s antigénmi mykobaktérií.

    Ako antigény používané ako tuberkulín PPD. a špecifické antigény, získaná genetickým inžinierstvom, najmä antigény ESAT-6 (skoré sekretovaný antigén o molekulovej hmotnosti 6 kDa) a CFP-10 (filtrát kultúry proteín 10 kDa). Genetické inžinierstvo alebo rekombinantné antigény chýbajú v bunkách vakcíny BCG a iných mykobaktériách. Pri použití tuberkulínu sú výsledky indukčného testu IFN-γ porovnateľné s výsledkami tuberkulínového kožného testu (priama korelácia). Pri použití geneticky upravených antigénov sú výsledky testov špecifickejšie a nezávisia od predchádzajúcej BCG vakcinácie. Pri testovaní očkovaných osôb, ktoré nemali kontakt s infekciou tuberkulózou, je špecifickosť testu 99%. Citlivosť testu u pacientov s tuberkulózou sa pohybuje od 81 do 89%.

    Testy a diagnostické nástroje boli vyvinuté na základe krátkodobú kultiváciu buniek alebo mononukleárnych buniek plnej krvi, izolovaných z krvi s antigénmi Mycobacterium tuberculosis in vitro s následným stanovením koncentrácie IFN-y alebo spočítaním počtu T-lymfocytov, ktoré syntetizujú IFN-y v. Koncentrácia interferónu syntetizované in vitro bola stanovená pomocou ELISA za použitia monoklonálnych protilátok viažucich IFN-y. Potom sa kalibráciou štandardného IFN-y stanoví jeho koncentrácia v skúmavke alebo v jamkách platne.

    Pri vykonávaní Elispotovho testu bol počet T-limocytov syntetizujúcich IFN-y. sa spočítajú na povrchu platne potiahnutej protilátkami proti IFN-y.

    vývojári diagnostiky na IFN-γ in vitro prostredníctvom indukcie, ktorý je schválený agentúrou pre liečivá a amerických produktov, tvrdí, že test je možné rozlišovať medzi latentné TBC z aktívnej tuberkulózy. Preto v regiónoch s vysokou úrovňou infekcie nie je test priamo diagnostikovaný. Avšak, v našej krajine, môže byť použitý pre odlíšenie infekcie tuberkulózy u detí od postvakcinačné alergií, ako aj posúdenie úrovne špecifickej imunity v procese liečby.

    V súčasnosti sa skúma domáci testovací systém na určenie indukcie syntézy IFN-y špecifickými tuberkulóznymi antigénmi in vitro.

    Imunitný stav a priebeh tuberkulózy, imunokorekcia

    V procese liečenia tuberkulózy u ľudí dochádza k zmenám v antigénii a stave imunitného systému.

    Údaje o zmenách v exsudátoch a tkanivách sú do značnej miery rozporuplné. Jediná vec, ktorú možno pozorovať s dobrým dôvodom, je to, že pri tuberkulárnych granulómoch sa zvyčajne zistí značný počet aktivovaných T-lymfocytov.

    Je rozumné zamerať sa na ďalšie dve ustanovenia, ktoré sú potrebné na pochopenie úlohy imunologických mechanizmov pri liečbe tuberkulózy u ľudí:

    • Pacienti s AIDS majú mimoriadne vysoký výskyt rezistencie na viaceré lieky;
    • s mnohonásobnou rezistenciou na liek (av neprítomnosti infekcie HIV) sú obzvlášť významné poruchy imunity (najmä t-bunková väzba).

    Keď tuberkulóza široko aplikovať rôzne metódy imunomoduláciu: ide najmä o lieky pôsobiace predovšetkým na imunity T-buniek a systém mononukleárnych fagocytov (týmusu hormóny, isoforon, likopid, polioksidony et al.). ako aj celých (zoslabených) mykobaktérií a ich zložiek.

    Molekulárno-biologická diagnostika tuberkulózy

    Pre metódy molekulárnej biológie v diagnostike infekčných ochorení zahŕňajú, najmä, metódy založené na manipuláciu s genetický materiál bakteriálnych a vírusových patogénov k identifikácii špecifického genetického materiálu - DNA segmenty, ktoré majú nukleotidové sekvenciu, špecifickú pre konkrétnu kmene typu alebo patogén na analýzu špecifických Sekvencie DNA v génoch, ktoré určujú citlivosť patogénu na určité liečivé látky a tiež funkčnú analýzu aktivity určitých génov patogénu. Molekulárne biologické techniky boli široko vo vedeckom výskume a praktické aplikácie v diagnostike a monitorovaní rôznych bakteriálnych a vírusových infekcií po otvorení v roku 1985, Carrie Myullisom (víťaz Nobelova cena. 1989) polymerázovú reťazovú reakciou.

    Princípy a možnosti metódy polymerázovej reťazovej reakcie

    PCR umožňuje amplifikovať (rozmnožovať) in vitro nukleotidovú sekvenciu (DNA fragment patogénu) niekoľko hodín v miliónoch časoch. Reakcia v prítomnosti jednotlivých DNA reťazcov určuje mimoriadne vysokú citlivosť testu.

    Nukleotidová sekvencia určitých oblastí v reťazci DNA určuje genetickú identitu mikroorganizmu, čo vysvetľuje vysokú špecifickosť PCR.

    Hodnota tejto techniky na detekciu a vyšetrovanie vlastností spôsobené Mycobacterium tuberculosis biologické vlastnosti mikroorganizmu, ktoré majú veľmi pomalý rast: čas Mycobacterium tuberculosis DNA zdvojenie pri kultivácii je 12-24 hodín.

    Princíp metódy PCR spočíva v amplifikácii - niekoľkonásobne, v mnohých prípadoch. vynásobenie častí špecifickej DNA sekvencie v mikrovolume trubice počas cyklického opakovania nasledujúcich troch reakčných stupňov, z ktorých každý prechádza v inom teplotnom režime:

    • Stupeň I - denaturácia dvojvláknovej DNA pri zahrievaní s divergenciou jej reťazcov;
    • II stupeň - komplementárna väzba (hybridizácia) primérov (primárne oligonukleotidy) s terminálnymi úsekmi reťazcov prísne špecifických, vybraných na násobenie fragmentu DNA;
    • Stupeň III - dokončenie fragmentu reťazca DNA pomocou termostabilnej DNA polymerázy.

    Na amplifikáciu in vitro musia byť molekuly matricovej DNA. štyri druhy deoxynukleosidtrifosfátů (nukleotidov) obsahujúcich vhodná dusíkatých báz: adenín (A), tymín (T), guanín (G), cytozín (C); umelo syntetizované primerové oligonukleotidy (priméry) pozostávajúce z párov 18 až 20 báz; termostabilná enzýmová DNA polymeráza s teplotným optimom 68 až 72 ° C a ióny horčíka.

    Špecifickosť PCR závisí od voľby DNA fragmentu. V súlade s tým sa syntetizujú oligonukleotidy bokového semena. Špecifickosť hybridizácie a kompletizácie reťazca DNA je spôsobená princípom komplementarity nasledujúcich dvojíc dusíkatých báz: adenín-tymín, guanín-cytozín.

    Pre stanovenie genómovej tuberkulózne mykobaktérie komplex najúčinnejší cieľ amplifikácie vo väčšine testovacích systémov vybraných fragmentov DNA IS6110, ktorá vo väčšine kmeňov Mycobacterium tuberculosis genómu má významné množstvo (10-20) opakovanie, ktorá poskytuje, spoločne so špecifickosťou, vysokej citlivosti testu. V rovnakej dobe, kmene Mycobacterium tuberculosis je popísané s malým počtom opakovaní alebo žiadnu IS6110 fragmentu.

    Izolácia molekúl DNA z biologickej vzorky

    Na vykonanie PCR by molekuly DNA patogénu mali byť izolované z biologického materiálu v minimálnom objeme s minimálnym množstvom nešpecifickej DNA a rôznymi inhibítormi enzýmovej DNA-polymerázy.

    Príprava vzoriek by sa mala uskutočňovať za podmienok, ktoré zabraňujú krížovej kontaminácii vzoriek izolovanými molekulami DNA. Pre dosiahnutie tohto cieľa je potrebné predbežné spracovanie miestnosti s ultrafialovým žiarením, podlahami a pracovnými plochami stolov a spotrebičov s roztokmi obsahujúcimi chlór. Tiež povinné používanie čistých rukavíc, jednorazových skúmaviek a hrotov na automatické pipety.

    Pre izoláciu DNA Mycobacterium tuberculosis z klinických vzoriek (mozgovomiechový mok, bronchiálna umývanie) neobsahujúce veľké množstvo buniek, bunkový odpad, alebo ich solí, je dostatočné na centrifúgovať vzorku 3-4 tis. Otáčky za minútu, pridá sa do kalu 20-30 ul 2% roztoku Triton X-100 a zahrieva sa pri teplote 90 ° C počas 30 minút.

    Na prípravu vzoriek spúta musí byť efektívne skvapalňovanie, ktorý sa všeobecne používa pre 4% roztoku hydroxidu sodného a N-acetyl-L-cysteín (Nalco), v množstve 50-80 mg na vzorku - v závislosti na viskozite vzorke. Roztok NALC sa musí pripraviť ex tempore alebo prášok NALC môže byť pridaný priamo do vzorky. Po odstredení sa musia vzorky skvapalniť počas 15 minút pri 3,5-4 tis. Otáčkach za minútu (3000 g) v objeme 50 ml skúmaviek so skrutkovým uzáverom, tj za tých istých podmienok, ktoré sa odporúčajú na predbežnú prípravu hlienu.

    Pre extrakciu DNA z metódy peliet sa použil najčastejšie založené na použití 5-6 M roztoku guanidínu izothiocyanátu lyzačný roztok, ako mikroporéznych častíc a oxidu kremičitého ( "kremeliny") sorbovať molekuly DNA. Nešpecifické látok, vrátane inhibítorov možné, potom sa premyje do 2,5 molárneho roztoku guanidinium izothiocyanátu a roztokom etanolu, načo sa molekula DNA desorbovanej vody, a tieto vzorky boli použité na vykonanie PCR. Pre zjednodušenie technológia izolácie DNA "kremelina" je často nahradený magnetické mikročastice potiahnutými oxidom kremičitým. V tomto prípade sa namiesto odstreďovania použije špeciálny magnetický stojan pre mikrotubuly na vyzrážanie častíc.

    V Rusku sa vyvinula pôvodná metóda imunomagnetického oddelenia mykobaktérií s následnou extrakciou DNA patogénu. Pre Mycobacterium tuberculosis imunomagnetické separáciu pomocou ferroparticles veľkosti 3-5 um, potiahnuté oxidom kremičitým, s ktorými sú spojené pomocou chemických väzieb polyklonálne (králik) protilátky proti Mycobacterium tuberculosis. Vzorky spúta po alkalickej lýze sa neutralizujú kyslým roztokom tris-HCl a inkubujú sa s imunomagnetickým sorbentom. Potom sa imunoferópové častice zhromažďujú magnetickou tyčou s vymeniteľným hrotom, prenesú sa na mikrodutku a vysrážajú sa. 20-30 čo ul 2% roztoku Tritonu X-100 a zmes sa zahrieva počas 30 minút pri teplote 90 o C. Supernatant sa používa ako DNA templát pre PCR analýzu.

    Zložitým problémom je izolácia DNA mycobacterium tuberculosis z bioptických vzoriek. Pri enzymatickej biopsii sa enzymatická proteinázová K používa pri konečnej koncentrácii 200 až 500 mg / l pri teplote 56 ° C cez noc. Ďalej sa používa jedna zo známych metód. Nadbytočná nešpecifická DNA v PCR analýze biopsií často spôsobuje inhibíciu reakcie, ktorá si vyžaduje opakovanú extrakciu DNA.

    Metódy zisťovania výsledkov

    Po ukončení reakcie sa amplifikované DNA fragmenty patogénu identifikujú rôznymi spôsobmi.

    Metóda gélovej elektroforézy je dobre známa. Takto získaný DNA fragment boli identifikované pozitívna kontrola, obsahujúci požadovaný špecifický fragment DNA alebo známe vopred veľkosti (počet párov báz), fragment, ktorý bol stanovený štandardný molekulárnej marker.

    V prítomnosti špecifického farbiva je do dvojvláknovej DNA zahrnutý etidiumbromid. syntetizovaný fragment DNA je detegovaný ako pás svietivý pod pôsobením ultrafialového žiarenia.

    Veľkosť fragmentu DNA, stanovená elektroforézou zo vzdialenosti od začiatku, musí zodpovedať známemu markeru molekulovej hmotnosti alebo pozitívnej kontrole.

    Ďalšie spôsoby určovania výsledkov PCR založené na hybridizácii s jediným reťazcom produktmi PCR s oligonukleotidom, komplementárne k nej - DNA sondy značené biotínom, následnou detekciou pomocou enzymatických reakcií, napríklad väzbou na streptavidin-biotín alkalickou fosfatázou.

    Na základe tohto typu detekcie boli vytvorené analyzátory PCR, v ktorých sa detekcia výsledkov PCR uskutočňuje automaticky ako výsledok odčítania optickej hustoty vo vzorkách po prejave enzymatickej reakcie.

    Nevýhody týchto metód sú možnosti intralaboratórnej kontaminácie pomerne krátkymi fragmentmi molekúl DNA. Keď molekuly vstupujú do nových vzoriek, stávajú sa matricou pre PCR a vedú k falošne pozitívnym výsledkom.

    V tomto ohľade, aby sa zabránilo falošne pozitívnym výsledkom, sú zavedené prísne pravidlá pre separáciu a izoláciu priestorov: extrahovanie DNA z biologických vzoriek; priestory na zisťovanie výsledkov (elektroforézy) z čistej zóny. Tieto priestory sú oblasťou pravdepodobnej kontaminácie. Ďalšia izolovaná oblasť je čistá miestnosť na zavedenie vzoriek DNA, ktoré sa majú testovať v skúmavkách s reakčnou zmesou pre PCR. Napokon sa predpokladá, že hlavné zariadenie - zosilňovač DNA - by malo byť umiestnené v samostatnej, prípadne kancelárskej miestnosti.

    Aby sa zabránilo kontaminácii produktov predchádzajúcich reakcií - niektoré testovací systém Likon-amp PCR namiesto dezoksinukleozidtimidina obsahujú dezoksinukleoziduridin, ktoré, ak sú súčasťou in vitro syntéza obvodu namiesto v správnej polohe, to znamená, Dusíková báza tymínu prítomná v natívnej DNA sa nahradí uracilom. Uracil DNA glykosylázy sa pridá do reakčnej zmesi na analyt, zničí iba kontaminujúce fragmenty deoxyuridín, ale nie natívne DNA analyzovaná. (R). Následné zahrievanie pri 94 ° C inaktivuje tento enzým a neinterferuje s amplifikáciou v PCR.

    Existuje testovací systém založený na izotermickej amplifikácii rRNA, pre ktorý sa najprv uskutočňuje reverzná transkripcia a syntéza molekúl DNA. ktorý je zasa matricou pre následnú syntézu molekúl RNA. Amplióny RNA sa detegujú pomocou sondy DNA farbených akridínom, keď sa hybridizujú v roztoku reakčnej skúmavky. Táto metóda okrem vysokej citlivosti má tú výhodu, že sa analyzuje v jednej rúrke, ktorá zabraňuje kontaminácii. Podľa autorov citlivosť tejto metódy v respiračných vzorkách dosahuje 90% so špecificitou 99-100%.

    Nové metódy detekcie sa implementujú v PCR v reálnom čase. Tieto metódy sa líšia primárne tým, že PCR a detekcia jeho výsledkov sa vykonáva súčasne v jednej uzavretej skúmavke. To nielenže technologicky zjednodušuje techniku ​​analýzy, ale tiež zabraňuje kontaminácii laboratórnych miestností a testovaných vzoriek produktmi predchádzajúcej PCR.

    V reálnom čase výsledkov detekcie PCR je v dôsledku fluorescencie vznikajúce pri fluorogenické DNA hybridizácie sondy s amplifitsi Rui-PCR v priebehu špecifických fragmentov DNA. Štruktúra fluorogenické sondy DNA konštruované tak, že fluorescenčný marker je vydaná ako výsledok enzymatické reakcie alebo vzdialený od molekuly najúčinnejšie bojujú fluorescencie iba za špecifické hybridizácie s požadovanou molekulou DNA, ktorý má byť amplifikovaný v priebehu PCR. Ako sa počet molekúl sondy hybridizovaly s zvýšenie fluorescencie je úmerná zistené úrovne počtu molekúl amplifikovaného produktu. Vzhľadom k tomu, pri každom počte cyklov PCR fragment molekuly DNA sa násobí o polovicu, číslo cyklu, pri ktorej sa fluorescencie stanovená a zvyšuje nepriamo úmerný počtu molekúl DNA v počiatočnom vzorke. V prípade, že reakcia je predstaviť ako kalibrátora niekoľko rôznych známych koncentrácií molekúl zodpovedajúcich DNA fragment Mycobacterium tuberculosis, použitím počítačového programu môže byť vypočítaná a množstva genómovej DNA v testovanom materiáli.

    Každá štandardná vzorka je duplikovaná. Kvantitatívnym kritériom je minimálny počet cyklov PCR potrebných na začiatok a rast určenej fluorescencie. Na súradnici - počet cyklov; súradnicou je hodnota fluorescencie. Koncentrácie DNA sú nepriamo úmerné počtu cyklov potrebných na výskyt fluorescencie. V pravom stĺpci (21-32) sú označené čísla cyklov pre príslušné koncentrácie. Rozdiely medzi 10-násobnými koncentráciami fragmentov DNA 10 2 -10 6 ml - 3,2 až 3,4 cykly. Pre dvoch pacientov boli koncentrácie fragmentov IS6110 asi 10 3 / ml a 10 4 / ml. Vzhľadom na počet opakovaní (6 až 20) fragmentov analyzovaných v genóme Mycobacterium tuberculosis je počet mykobaktérií v klinických vzorkách približne 100 a 1000 buniek.

    Použitie PCR pri diagnostike tuberkulózy

    Metóda PCR sa najčastejšie používa na urýchlenie diagnostiky tuberkulózy - detekcia mycobacterium tuberculosis v klinických vzorkách: spúta. bronchiálna výplach, pleurálny výpotok, moč, mozgovomiechová mok, punctates osteolýzy, aspirates ženského pohlavného ústrojenstva a biopsia iného. V štúdii v Holandsku boli študované asi 500 spúte a bronchiálna laváže vzoriek od 340 pacientov s potvrdenou diagnózou pľúcnej tuberkulózy porovnať citlivosť metódy PCR, mikroskopia a štúdie kultúra náteroch. Citlivosť analýzy bola 92,6,88,9 a 52,4%. Špecifickosť všetkých metód bola približne 99%.

    Porovnanie účinnosti detekciu Mycobacterium tuberculosis metód ster mikroskopia, siatie na Lowenstein-Jensen médium, testovacie systémy VASTES a PCR analýzy. PCR ukázala citlivosť 74,4%, mikroskopie - 33,8%, inokulácia pevného média - 48,9% a VASTES - 55,8%. Priemerný čas detekcie na očkovanie na médiu Levenstein-Jensen je 24 dní. VASTES - 13 dní, PCR - 1 deň.

    Uvádzajú sa aj možnosti využitia PCR ako citlivej a rýchlej metódy monitorovania účinnosti liečby tuberkulózy.

    Detekcia Mycobacterium tuberculosis DNA pomocou PCR s účinnej chemoterapie určí po dlhšiu dobu - v priemere 1,7 mesiaca v porovnaní s stere definovaným pod fluorescenčným mikroskopom, a od 2,5 mesiaca v porovnaní s bakteriologického vyšetrenia.

    Diagnóza extrapulmonárnych foriem tuberkulózy

    Hodnota ako citlivú metódou PCR je obzvlášť veľký pre mimopľúcna formy, pretože tvorí v týchto klinických a rádiografických metód obvyklých bakteriologické metódami stanovovania Mycobacterium tuberculosis v diagnostických materiálov neúčinné.

    Pri skúmaní vzoriek moču PCR výsledky boli pozitívne v 16 z 17 pacientov s aktívnou tuberkulózou a negatívne močového 4 pacientov neaktívne obličiek tuberkulózy a 39 pacientov s močovou nontubercular ochorenia systém.

    Účinnosť analýzy PCR v štúdii aspirátov kostnej drene u pacientov s horúčkou neznámeho pôvodu bola preukázaná v prípadoch podozrenia na tuberkulózu. Na diagnostiku tuberkulóznej lymfadenitídy bolo u detí skúmaných 102 odberov a biopsia vzorky 67 detí s podozrením na tuberkulóznu lymfadenitídu. Boli získané pozitívne výsledky: 71,6% PCR v reálnom čase. fluorescenčná mikroskopia - 46,3%. kultúrny výskum - 41,8%. V štúdii s 50 biopsiami lymfatických uzlín u pacientov s "škrabkou" boli všetky výsledky negatívne. Preukázala sa 100% špecificita PCR analýzy. V tej istej práci bola preukázaná možnosť detekcie M. avium s punkčnou biopsií lymfatických uzlín.

    Diagnóza tuberkulózy ženskej genitálnej oblasti neplodnosti, ako je známe, je jedným z najťažších problémov diagnostiky. Pri skúmaní PCR biopsie endometria, endometriálne vdychovanie kvapalných vzoriek od Douglas priestoru 14 (56%) z 25 vyšetrených pacientov laparoskopicky podozrenie na tuberkulózu, boli získané pozitívne výsledky. Pomocou mikroskopie a kultúry sa získali 1 a 2 výsledky. Tieto prípady boli tiež pozitívne na PCR. Väčšina PCR-pozitívnych výsledkov súvisí s prípadmi s charakteristickými príznakmi tuberkulózy podľa histologickej štúdie; menšie číslo - s podozrením na tuberkulózu podľa laparoskopických údajov. Pri absencii laparoskopických údajov o tuberkulóze sa získal len jeden pozitívny výsledok PCR analýzy.

    V diagnostike mimopľúcna TB lekárov často vyvoláva otázku identifikácia patogénu v štúdiu vzoriek krvi pomocou PCR. Publikované údaje ukazujú, že detekcia Mycobacterium tuberculosis DNA zo vzoriek krvi je možné vo veľmi pokročilom forme HIV. Mycobacterium tuberculosis DNA bola detekovaná iba v generalizované tuberculosis rôznych orgánoch u pacientov s transplantáciou obličiek a imunosupresie.

    Identifikácia druhov mykobaktérií

    Metóda PCR môže byť veľmi účinná pre rýchlu identifikáciu mykobaktérií z tuberculosis a niektorých druhov mykobaktérií nontubercular po obdržaní ich počiatočný rast. V tomto prípade použitia PCR môže ušetriť 7-10 dní požadované pre pozitívnu identifikáciu následné kultúry. Výskum PCR je technicky veľmi jednoduché, pretože nevyžaduje komplikované prípravy vzoriek klinickým materiálom, aby sa dosiahlo vysokej citlivosti. V štúdii 80 pozitívne v tomto testovacom systéme (firmy MB Vasto. Organon) všetky pozitívne kultúry PCR boli prísne špecifické a udržuje po dobu 1 dňa. Pre identifikáciu iných druhov mykobaktérií v príprave DNA patogénu kultúry hybridizované so špecifickými DNA sondami značenými akridín a kmene zistených vzhľadu chemiluminiscencie prostredníctvom chemiluminometru alebo nitrocelulózové prúžky s vizuálnym hodnotením po hybridizácii. Pri použití takéhoto kitu identifikoval obmedzený počet druhov: Mycobacterium tuberculosis komplex. M. avium, M. avium, M. kansasii a M. gordonae.

    A.Telenti a kol. tiež vyvinul relatívne jednoduchý a lacný spôsob identifikácie druhov klinicky významných druhov mykobaktérií pomocou PCR a následnou reakciou s dvoma reštrikčnými enzýmami (enzýmy, ktoré majú schopnosť znížiť molekulu DNA na špecifických miestach). Fragment DNA sa amplifikuje. ktorý kóduje proteín tepelného šoku (65 kDa), a potom PCR fragment 439 nukleotidových párov produkovaných pomocou PCR sa spracuje oddelene dvoma enzýmami, Bste II a Nae III. Potom analyzované pomocou elektroforézy v agarosovém gélu získané dva produkty, určenie ich veľkosti (počet párov báz) pomocou štandardnej súbor fragmentov DNA (molekulová DNA markery) v dĺžke od 100 do 1000 párov báz. V každom z týchto špecifických typov (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M.fortuitum) detekovať dva alebo tri DNA fragmenty rôznej veľkosti pre každý reštrikčné enzým. Kombinácia rozličných veľkostí DNA umožňuje rozlíšiť tieto druhy medzi sebou.

    Technológia biologických DNA mikročlánkov sa vyvíja. čo pomôže identifikovať viac ako 100 druhov mykobaktérií v jednej štúdii.

    Identifikácia druhov sa môže tiež vykonávať pomocou PCR amplifikáciu variabilnej oblasti 16S rRNA nasleduje sekvenovanie amplikónov pri porovnaní so zodpovedajúcou primárnou štruktúre, ktorá umožňuje identifikáciu viac ako 40 druhov mykobaktérií.

    Pomocou PCR sa môže uskutočniť aj identifikácia druhu v komplexe mycobacterium tuberculosis vrátane diferenciácie M. bovis a M. bovis BCG. Na tento účel sa analyzuje prítomnosť alebo neprítomnosť niektorých génov v genómových oblastiach RD1. RD9 a RD10. RD1 chýba v M. bovis BCG, ale je prítomný v virulentných druhoch vrátane M. bovis.

    Stanovenie citlivosti lieku Mycobacterium tuberculosis na liečivo pomocou PCR

    Ciele molekulárne genetických metód pre liekové vnímavosťou alebo odolnosťou Mycobacterium tuberculosis znížiť na identifikáciu mutácií v špecifických nukleotidových sekvencií známych génov. Základné metódy sú založené buď na priamom prochityvanii (sekvenovanie) týchto sekvencií po amplifikáciu a hybridizáciu DNA fragmentov biotínom značené amplifikovanej v PCR sond DNA. Obe alternatívy zahŕňajú identifikáciu substitúcie nukleotidov v sekvenciách, ktoré používajú sondy DNA vedú k neprítomnosti alebo neúplné hybridizácii na nitrocelulózové membránu s použitím enzýmového konjugátu (streptavidín-alkalická fosfatáza) - Metóda Lípa-Rif-TB.

    Metóda pre meranie fluorescencie v miestne upevnený na mikrovýbrusů DNA sondami komplementárnym so známymi mutáciami v PCR amplifikovaných oblastí génu zodpovedné za rezistenciu alebo citlivosti na lieky, tzv mikrobiochipov metóda. Hlavný algoritmus na vykonanie tohto výskumu je nasledujúci. Po izolácii DNA z klinickej vzorky alebo kultúry mykobaktérií je nutné vykonať PCR amplifikáciu príslušných fragmentov rpoB génu zodpovedného za citlivosti na lieky na rifampicín alebo katG a inhA génov kódujúcich proteíny Mycobacterium sú zodpovedné za citlivosť na izoniazid. Výsledky PCR boli hodnotené pomocou elektroforézy v agarosovém gélu, v ktorej potvrdí príjem príslušných DNA fragmentov na požadovanú dĺžku. Potom sa uskutoční druhé kolo PCR, aby sa do DNA vložila fluorescenčná značka. Výsledky PCR sa opäť potvrdili gélovou elektroforézou. Potom, hybridizácia bola vykonávaná (inkubácie cez noc), s následným premytím výsledného materiálu na biočipu, ktorý je veľký počet pevných do malej sklenenej dosky krátkych reťazcov DNA (sond), ktoré sú komplementárne s nukleotidovej sekvencie typu Mycobacterium tuberculosis senzitívnym v miestach možných mutácií. ako aj mutantných sekvencií zodpovedných za rezistenciu voči lieku. Umiestnenie DNA sond na tanieri - v pravom slova zmysle, a úroveň fluorescencie pozorované pri hybridizácii k určeniu výsledku pomocou špeciálneho čítacieho zariadenia je inštalovaný. V tejto súvislosti sú výsledky analýzy určené pomocou špeciálneho počítačového programu.

    V posledných rokoch boli vyvinuté alternatívne metódy na stanovenie citlivosti na mykobaktériu tuberkulózy na základe technológie PCR v reálnom čase, ktoré umožňujú vykonať tieto štúdie v uzavretom skúmavke.

    Na obr. 13-13 ukazuje výsledok analýzy klinických izolátov Mycobacterium tuberculosis pri určovaní odolnosti voči rifampicínu pomocou PCR v reálnom čase: 218 - kontrolná vzorka (citlivé na rifampicín); 93 - pozitívna kontrola pre mutáciu Ser-Trp TCG-TGG; 4482 - pozitívna kontrola pre mutáciu Ser-Leu TCG-TTG; 162-322 - experimentálne vzorky. Výsledok výpočtu kinetických kriviek amplifikácie na 4 kanáloch: kanál 1: 393 - pozitívna kontrola pre mutáciu Ser-Trp TCG-TGG; kanál 2: 4482 - pozitívna kontrola pre mutáciu Ser-Leu TCG-TTG; 162, 163, 172, 295 - experimentálne vzorky; kanál 4: kinetické krivky amplifikácie všetkých vzoriek zúčastňujúcich sa experimentu. Pozitívna kontrola amplifikačnej reakcie. Závery: Na základe výsledkov analýzy boli identifikované nasledujúce mutácie, ktoré určujú rezistenciu na rifampicín: vo vzorkách 162,163,172,295-Ser-Leu TCG-TTG. Rovnaký princíp bol použitý na stanovenie rezistencie voči izoniazidu voči génom katG a inhA, čo určuje najčastejšie mutácie.

    Identifikácia kmeňa mycobacterium tuberculosis

    Najviac dôkladne študovaný spôsob identifikácie kmeňov Mycobacterium tuberculosis je technika tzv polymorfizmu dĺžky reštrikčných fragmentov (RFLP RFLP,., Alebo v anglickom znení), a ktorý je založený na fragmentirovanin (obmedzenia) z Mycobacterium tuberculosis DNA enzýmom PvuII a fragmenty získané následnú hybridizácii s určitými špecifickými sekvenciami na DNA jeho opakovaný prvok IS6110. Vnútrodruhová variabilita realizované rôznymi počty opakovaní IS6110 a ich umiestnenie na DNA. ako aj rôznych vzdialeností medzi určitých miestach reštrikčné útok enzýmu (reštrikčné miesta) a prvok IS6110. Táto technológia je veľmi zložitá a časovo náročná. Po ošetrení DNA extrahované z kultúry Mycobacterium tuberculosis, gélová elektroforéza sa vykonáva s štiepenia enzýmom, a potom sa prenesie DNA fragmenty rôznej dĺžky na nitrocelulózové membránu, hybridizácia bola vykonávaná s fragmentmi IS6110 prvku a detekovaná pomocou enzymatické reakcie. Špecifické DNA prúžky výsledný vzor charakterizuje konkrétny kmeň Mycobacterium tuberculosis. Pomocou počítačovej analýzy sa zistí identita alebo príbuznosť kmeňov. Napriek skutočnosti, že metóda RFLP je naj diskriminačnejšia, t.j. identifikuje najväčší počet rozdiely v analyzovaných kmeňov, je neúčinné pre malé množstvo (menej ako 5), IS6110-looping pozorované u niektorých kmeňov. Na obr. 13-14 znázorňuje výsledky RFLP-typovania kmeňov.

    Alternatívou môže byť metóda spoligotypizácie - analýza polymorfizmu distančných DNA sekvencií - medzi medzi priamymi opakovaniami oblasti DR. Pri vykonávaní spolygotypovania kmeňov sa uskutočňuje PCR s primérmi ohraničujúcimi oblasť DR, po ktorej sa vytvoria fragmenty s rôznou dĺžkou, ktoré hybridizujú s variabilnými strednými oblasťami DNA. Analýza distančných sekvencií oblasti DR je prezentovaná. podľa výskumníkov, jednoduchšie, produktívnejšie a vhodnejšie na primárne skríning kmeňov a predbežnú epidemiologickú analýzu, ako aj na priamy výskum klinického materiálu.

    Je zrejmé, že účinnejšou a technologicky dostupnejšou metódou je VNTR (skratka anglických slov) alebo metóda určovania variabilného počtu presných tandemových opakovaní v DNA mycobacterium tuberculosis. Táto metóda je založená iba na použití PCR a nevyžaduje dodatočnú manipuláciu. Pretože počet tandemových opakovaní v rôznych kmeňoch a na rôznych miestach je odlišný, stanovia sa fragmenty rôznych veľkostí a analyzujú sa na výslednej elektroforéme PCR produktov. Podľa vedcov sa pomocou VNTR dosahuje väčší stupeň diskriminácie kmeňov ako pomocou metódy RFLP.

    V posledných rokoch bola venovaná veľká pozornosť distribúcii kmeňov Mycobacterium tuberculosis z rodiny W-Beijing (niekedy nazývaných pekinským kmeňom), ktoré sú z veľkej časti odolné voči drogám.

    Základné požiadavky na kvalitu molekulárneho biologického výskumu

    Základné regulačné dokumenty pre PCR

    Objednávky Ruské ministerstvo zdravotníctva: №45 od 02.07.2000 g.. číslo 109 z 21.03.2003 g.. číslo 64 z 21.02.2000, pokynov: 1.3.1888-04 "Organizácia práce v štúdiách s použitím PCR materiálu infikované patogénnym biologický činidlá skupiny III-IV patogénnosti "; 1.3.1794-03 "Organizácia práce pri štúdii PCR materiálu infikovaného mikroorganizmami patogénnych skupín I-II". 2003. 3.5.5.1034-01 "Dekontaminácia materiálu, infikované baktérie I-IV patogenity skupiny pri použití PCR," 2001 doplnku 11 k jednotnej pokyny pre mikrobiologické vyšetrovacie metódy v identifikácii, diagnostiku a liečbu tuberkulózy.

    Zamestnanci

    Prevedenie molekulárne biologickom výskume môže držať doktormi klinické laboratórne diagnostiky, lekári bacteriologists, virologists, lekári, biológovia, klinické diagnostické laboratóriá, rovnako ako špecialistov so stredným vzdelávanie lekárov, prešiel špecializáciu a pokročilý výcvik v predpísaným spôsobom.

    Usporiadanie laboratórnych priestorov

    Vyžadujú sa tieto laboratórne miestnosti:

    • Oblasť spracovania vzoriek je laboratórium prispôsobené na prácu s infekčnými agensmi patogénnych skupín III-IV podľa metodických pokynov 13.1888-04.
    • Zóna na prípravu reakčných zmesí PCR - laboratórna miestnosť, ktorá zabezpečuje ochranu pred vnútornou laboratórnou kontamináciou - "čistá" zóna.
    • • Ak sa na analýzu produktov PCR používa elektroforéza alebo hybridizácia. laboratórium miestnosť, v ktorej sú vynásobený fragmenty DNA sa extrahuje z trubiek a zosilnenie, v tomto poradí, sa môže dostať do životného prostredia, v súlade s požiadavkami na PCR laboratória (1.3.1794-03 pokyny, vedenie 1.3.1888-04) musia byť plne je izolovaný od priestorov uvedených v predchádzajúcich odsekoch. Malo by byť vylúčené z pohybu zóny k zónovej elektroforézy pre zaobchádzanie so vzorkou a "čistú" oblasti akéhokoľvek personálu, zariadení, použitých materiálov a predmetov, rovnako ako prenos vzduchu ventilačným systémom, alebo v dôsledku prievanu. Táto zóna sa nevyžaduje na fluorimetrickú detekciu PCR produktov.
    • Miestnosť na dokumentáciu a spracovanie výsledkov je vybavená počítačmi a potrebným kancelárskym vybavením. Táto miestnosť môže obsahovať zariadenia, ktoré zabezpečujú detekciu produktov PCR bez otvorenia trubice. - fluorescenčné detektory PCR a tepelné cykly pre PCR v reálnom čase.

    Sanitárne a epidemiologické požiadavky na primárnu liečbu hlienu sú podobné štandardným mikrobiologickým požiadavkám na liečbu tuberkulózy mykobaktérií.

    Dokončenie laboratórneho zariadenia pre diagnostiku PCR

    Laboratórium zahŕňa zariadenia pre nasledujúce miestnosti.

    • miestnosť na prípravu vzoriek obsahuje nasledovné vybavenie: laminárna druhá trieda ochrany "SP-1.2": pevný termostat s vyhrievacím krytom pre skúmavky typu "Eppendorf"; mikrocentrifugácia pri 13 000 ot / min; odstredivka (vortex); chladnička s teplotným rozsahom od -20 ° C do +10 ° C; pipety s variabilným objemom radu "Rroline"; čerpadlo s odlučovačom OM-1; stativ na pipety; stacionárna pracovná stanica 200 x 0,5 ml; stativová pracovná stanica 50 x 1,5 ml; Stojany na uloženie skúmaviek 80x1,5 ml;
    • Miesto na prípravu reakčnej zmesi: ochranná komora PCR-box ("Laminar-C, 110 cm); odstredivka - Vortex; Pipety s variabilným objemom série Proline; stativ na pipety; stacionárna pracovná stanica 200 x 0,2 ml; Stojany na uloženie skúmaviek 80x1,5 ml; chladnička s teplotným rozsahom od -20 ° C do + 10 ° C;
    • miestnosť na elektroforézu: kamera na horizontálnu elektroforézu; napájanie; transiluminátor;
    • Zosilňovače DNA alebo analyzátory nukleových kyselín (PCR v reálnom čase) s počítačom a softvérom; môže byť umiestnená v ľubovoľnej voľnej miestnosti. Ak sa používa technológia PCR v reálnom čase. miestnosť na elektroforézu nie je potrebná.

    Externá kontrola kvality

    Aby boli laboratóriá dôveryhodné pri získavaní objektívne spoľahlivých výsledkov, mali by sa zapojiť do systému externého hodnotenia kvality laboratórneho výskumu.

    Účastníci systému kontroly kvality dostávajú; 12 fľaštičiek lyofilizovaných bakteriálnych bunkových suspenzií, z ktorých dve obsahujú E. coli E. kokosové vlákno, 3 fľaštičky s Mycobacterium tuberculosis (avirulentní kmeň) v 10 2 / ml; 3 ampulky s bunkami podobného kmeňa v koncentrácii 104 / ml; 2 ampulky s netuberkulóznymi mykobaktériami M. avium-intracellulare a M. kansasii v koncentrácii 105 / ml.

    Distribuované testy na externé hodnotenie kvality sú predbežne testované v dvoch nezávislých laboratóriách s rozsiahlymi skúsenosťami v tejto oblasti.